吴敏
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关领域：生物学更多>>
- 蛋白酶体激活因子REGγ与泛素连接酶Smurf1相互作用的初步研究
- 蛋白酶体系统是生物体内一类受多种复杂因素调控的蛋白质降解系统,在机体蛋白质的降解调控过程中具有重要的作用。目前研究揭示蛋白酶体主要由20S中央核心催化腔和两侧的调节亚基组成。其中,20S中央核心催化腔呈圆筒状结构,由外侧...
- 吴敏
- 关键词：泛素连接酶
- 文献传递
- 蛋白酶体激活因子REGγ的重组表达及其体外功能的初步探讨
- 2010年
- 目的蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位(11S regulator complex gamma subunit,REGγ)的重组表达,初步探讨其与骨形成负调控分子酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(caseinkinase-2interactingprotein-1,CK-IP-1)的相互作用。方法首先以质粒pCMV-Myc-REGγ为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出765bp的REGγcDNA片段,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2并转化入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,表达产物超声破碎后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定,进而通过GSTPull-down实验验证REGγ是否与CKIP-1存在相互作用。结果通过测序证实原核表达载体pGEX-4T-2-REGγ构建成功,进一步表达鉴定发现GST-REGγ蛋白主要以可溶性的形式存在于裂解上清中;GSTPull-down实验表明REGγ与CKIP-1存在明显的相互作用。结论REGγ与CKIP-1在体外存在相互作用,为进一步深入研究REGγ对CKIP-1的调控作用奠定了基础。
- 吴敏聂晶张令强汪渊
- 关键词：质粒聚合酶链反应
