葛科立
- 作品数：29 被引量：31H指数：4
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 促进ABCG2基因表达的saRNA及其应用
- 本发明属于生物医药技术领域，涉及一种促进ABCG2基因表达的saRNA及其应用；首次设计了靶向ABCG2基因的saRNA，包括人类ABCG2saRNA为saRNA‑1′、saRNA‑2′，小鼠ABCG2saRNA为：sa...
- 葛科立贾少平葛银林薛美兰宋志刚
- 内源性n-3多不饱和脂肪酸对下丘脑神经干细胞来源外泌体miRNA的调节被引量：3
- 2022年
- 目的:通过培养fat-1转基因小鼠下丘脑神经干细胞获取外泌体并提取总RNA进行高通量测序,研究内源性n-3多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids,n-3 PUFAs)对丘脑神经干细胞来源外泌体miRNA的调节作用,探究n-3 PUFAs抑制下丘脑炎症及肥胖的作用机制。方法:分别培养fat-1转基因小鼠与野生型C57BL/6小鼠下丘脑神经干细胞,从细胞培养上清液中收集外泌体并提取总RNA,经高通量测序后利用生物信息学技术对差异表达的miRNA进行分析及靶基因预测,对靶基因进行基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析后,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)进行相对表达量的测定。结果:与野生型C57BL/6小鼠相比,fat-1转基因小鼠下丘脑神经干细胞来源的外泌体miRNA具有特异表达谱,且具有显著差异表达的miRNA靶基因处于下丘脑炎症、脂肪酸代谢等通路中关键位置。经qPCR验证,差异表达的miRNA关键靶基因表达均受到调控。结论:内源性n-3 PUFAs水平的增加可以调节下丘脑神经干细胞外泌体中miRNA的表达,进而调控炎症反应与脂质代谢相关基因的表达,从而发挥抑制下丘脑炎症、抵抗肥胖的作用。
- 路宗博张盈月葛科立张金玉薛美兰葛银林
- 关键词：外泌体MIRNA
- 一种抗肿瘤的外敷药贴组合物
- 本发明属于中药技术领域，涉及一种以中草药为原料的抗肿瘤的药物组合物；其原料包括蜈蚣，蝎子，僵蚕，重楼，水蛭，黄药子，人参，黄芪，白术，茯苓，鹿角胶，龟板胶，白芍，枸杞，熟地，川芎，紫河车，虎杖等；将选用的各味中药磨制成2...
- 倪同上黄彩娜胡瑞鹏王宏韬葛科立刘天蔚郭云良
- 文献传递
- 一种治疗宫寒不育的药物组合
- 本发明属于中药组合物制备技术领域，涉及一种治疗宫寒不育的药物组合，其药物组合中各原料按照重量组分为：炒红小豆10‑15份、玫瑰花1‑2份、崂山参10‑12份、芡实10‑15份、附子6‑9份、巴戟天20‑24份、山药20‑...
- 倪同上王宏韬胡瑞鹏葛科立王婷婷张皓刘春燕王惠青周永红郭云良
- 文献传递
- 体外合成的ABC转运蛋白2 mRNA在小鼠体内表达促进尿酸排泄被引量：3
- 2021年
- 高尿酸血症是指嘌呤代谢紊乱尿酸在体内堆积所导致的慢性代谢疾病,近年来其发病率增高且发病年龄呈现年轻化趋势,寻找有效的治疗靶点以及治疗方法是当前研究的热点。尿酸盐转运蛋白ABC转运蛋白2(ATP-binding cassette subfamily G member 2,ABCG2)主要表达于肾,促进尿酸排泄。本研究通过体外合成ABCG2 mRNA,将其转染至高尿酸血症模型小鼠体内,观察对小鼠尿酸的影响及其相关作用。化学合成ABCG2 mRNA的DNA模板,体外转录mRNA修饰后转染到小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1,Western印迹检测细胞中的蛋白质表达。结果显示,TCMK-1细胞中的蛋白质表达量与mRNA转染量呈正相关(P<0.01),提示转染成功。动物实验,将24只SPF级小鼠随机分为正常组、高尿酸血症模型组、苯溴马隆治疗组[20 mg/(kg·d)]和mRNA治疗组[2 mg/(kg·3d)],共4组(n=6)。边造模边治疗持续28 d,治疗结束后检测其血尿酸、尿液中尿酸、血肌酐、血尿素氮和肝中黄嘌呤氧化酶指标。结果显示,与模型组小鼠相比,mRNA治疗能显著降低小鼠血尿酸(100.38±10.94)及血尿素氮(6.30±1.10)、肌酐(30.86±5.78)水平(P<0.05或P<0.01),升高小鼠尿液尿酸(617.48±50.34)水平(P<0.05),促进尿酸排泄,对肝中黄嘌呤氧化酶活性(26.19±2.58)无显著影响。HE染色观察小鼠肾病理结构改变。结果显示,与模型组小鼠相比,mRNA治疗组小鼠肾内肾小管细胞水肿、炎细胞浸润等病理损伤得到明显改善。qRT-PCR检测小鼠肾组织mRNA相对表达量,免疫组化、Western印迹检测小鼠肾ABCG2蛋白质表达水平。结果显示,mRNA组小鼠肾组织中ABCG2 mRNA及其蛋白质相对表达量明显上调(P<0.01)。综上所述,体外修饰合成的ABCG2 mRNA可以在高尿酸小鼠模型体内成功表达,并促进尿酸及其它有机离子排泄,同时改善小鼠肾损伤。该结果为临床利用ABCG2基因作为治疗高尿酸血症相关疾病的靶点提供了实验依据。
- 孙忠兴葛科立张志霞张志霞张金玉张金玉
- 关键词：高尿酸血症肾功能
- 基于AS1411适配体的DNA-RNA杂交载体的抗肿瘤研究
- 2023年
- 目的研究连接适配体的DNA-RNA分子作为杂交载体靶向肿瘤细胞并导入功能性RNA分子进入细胞的有效性,以及对肿瘤细胞的影响。方法设计合成短的互补DNA、RNA分子,组装成DNA-RNA杂合链;连接AS1411适配体为靶向分子,再分别连接p21 saRNA和TIGIT siRNA作为药物分子,记为P21 saRNA和TIGIT siRNA,构成杂交载体,通用结构式为AS1411-DNA/RNA-sxRNA;检测AS1411-DNA/RNA-sxRNA能否靶向结合并进入肿瘤细胞及其对瘤细胞生存、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果将设计的杂交载体各部分等摩尔加入杂交缓冲体系并于特定温度条件下孵育,TBM聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到AS1411-DNA/RNA-sxRNA成功组装;AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体在10%血清条件下也显示出良好的抗降解稳定性;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察,SKOV3细胞表面及胞内存在绿色大量荧光信号,杂交载体成功进入肿瘤细胞。杂交载体孵育后:在mRNA水平上,p21基因表达(2.14±0.25)是对照组(1.02±0.10)2倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.63±0.09)低于对照组(1.09±0.15),P<0.05;在蛋白质水平上,p21基因表达(1.57±0.16)是对照组(1.10±0.09)1.5倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.61±0.12)低于对照组(1.01±0.07),P<0.05。CCK-8实验显示,P21saRNA(3.10±0.13)和TIGIT siRNA(2.91±0.13)杂交载体孵育组与空白对照组(3.67±0.15)相比,卵巢癌细胞增殖能力显著下降(P<0.05);划痕实验结果显示,P21 saRNA孵育组愈合率(42.53±2.90)%、TIGIT siRNA孵育组愈合率(36.23±3.43)%,明显低于空白对照组(76.47±3.64)%,P<0.05;Transwell检测迁移能力发现:P21 saRNA孵育组(128.25±5.36)、TIGITsiRNA孵育组(119.50±8.79)低于对照组(186.5±8.56);侵袭能力:P21saRNA孵育组(145.5±9.45)、TIGITsiRNA孵育组(112.25±5.63)也显著低于对照组(202.50±10.12),P<0.05;细胞凋亡率:P21saRNA孵育组(11.74%±2.47%)、TIGIT siRNA孵育组(17.12%±2.04%)明显高于对照组(5.66%±1.44%),P<0.05。结论所制备的AS1411-DNA/RNA
- 赵昌麒葛科立贾子涵白佳瑶张金玉葛银林
- 关键词：小RNA肿瘤
- 一种治疗痛风的外敷药贴组合物
- 本发明属于中药技术领域，涉及一种以中草药为原料的治疗痛风的外敷药贴；其原料包括苍术、黄柏、薏米、川牛膝、怀牛膝、土茯苓、萆薢、车前草、威灵仙、丹参、鸡血藤、忍冬藤、海风藤、络石藤、桃仁、红花、猪苓、汉防己等；将选用的各味...
- 倪同上黄彩娜胡瑞鹏王宏韬葛科立刘天蔚郭云良
- 文献传递
- n-3多不饱和脂肪酸对小鼠血液外泌体中miRNA的调节和抑制肥胖作用被引量：4
- 2021年
- 目的:研究体内n-3多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids,n-3 PUFAs)含量的增加对小鼠体质量和血液中外泌体miRNAs表达的影响,探讨n-3 PUFAs通过外泌体抑制肥胖的作用机制。方法:利用能自发生成n-3 PUFAs的fat-1转基因小鼠和同窝野生型小鼠(对照),通过高脂饮食(high-fat diet,HFD)建立肥胖动物实验模型,测定小鼠体质量。提取小鼠血浆中的外泌体并鉴定;分离外泌体内的RNA,构建文库并进行miRNA高通量测序。根据测序结果通过生物信息学方法分析找到其调控的靶基因和相关联的通路,发现miRNA-靶基因互作关系。验证miRNA与肥胖的关联度以及在肥胖中所发挥的作用。结果:fat-1转基因小鼠体质量明显低于野生型;外泌体提取鉴定成功;miRNA高通量测序结果显示,不同小鼠组间进行对比时,差异表达显著(P<0.05且差异倍数(fold change,FC)≠1)的miRNA有46个;生物信息学分析发现6个重要miRNA(mmu-miR-665-3p、mmu-miR-122-5p、mmu-miR-122-3p、mmu-miR-194-5p、mmu-miR-34c-5p、mmu-miR-223-3p)落在脂肪酸代谢通路以及内吞通路关键位置,功能与脂质代谢和肥胖相关,所对应的靶基因分别为Fads1、Elovl2、Elov6、Hadha、Scad1、Scad2、Hsd17b12、Acot2、Acot4和Arf6、H2-T-ps、Arrb1、Ist1、H2-T10、Wwp1、Snx4、IL2rb、Mvb12b、Rab11、fip3、Kif5a、Nedd4l。结论:n-3 PUFAs含量的增加能够有效降低小鼠的体质量,抑制肥胖。n-3 PUFAs能够调节血液中外泌体内miRNA的表达,其中具有显著差异性的miRNA与肥胖有关,其相关的靶基因集中在脂质代谢相关的分子通路中,提示可能是n-3 PUFAs降低体质量抑制肥胖机制之一。
- 吴聪葛科立路宗博郑征张金玉薛美兰葛银林
- 关键词：N-3多不饱和脂肪酸外泌体MIRNA肥胖高通量测序
- 人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路。方法MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B(Akt)表达的影响,MTT法观察细胞的存活率。结果6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01)。结论人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用。
- 葛科立陈文芳
- 关键词：人参皂甙羟多巴胺毒性作用蛋白激酶B
- 一种特异结合癌细胞蛋白B7-H4的纳米抗体H6的序列和应用
- 本发明提供了一种特异结合癌细胞蛋白B7‑H4的纳米抗体H6的序列和应用，涉及生物医学技术领域，该结合癌细胞B7‑H4的单域抗体能够与多种癌细胞特异性结合并抑制其繁殖，具有如SEQ ID NO.1和2所示序列，具有精确识别...
- 葛科立刘瑜葛银林薛美兰张金玉
- 文献传递
