段龙川
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 供职机构：华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪链球菌谷氨酰胺tRNA合成酶的原核表达产物的小鼠免疫试验被引量：2
- 2010年
- 【目的】猪链球菌谷氨酰tRNA合成酶(Glutamyl tRNA Synthetase,GtS)是一种催化谷氨酰胺与对应的tRNA发生酯化反应形成谷氨酰tRNA的蛋白酶。本研究通过小鼠免疫保护力实验来评价Gts的免疫原性。【方法与结果】使用clustalX对GenBank中链球菌属的GtS进行同源性分析,结果显示GtS的氨基酸序列在链球菌属内同源性达到95%以上。利用原核表达系统在大肠杆菌BL21中表达(His)6-GtS融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot结果表明该融合蛋白在BL21菌株中高效表达,并且具有良好的免疫原性。融合蛋白经过组氨酸标签纯化试剂盒(Novagen)纯化后获得纯度为93.3%、浓度为433μg/mL的重组蛋白rGtS。在小鼠免疫保护试验中,使用rGtS混合弗氏佐剂免疫Balb/c小鼠。免疫过后用4倍LD50剂量的SC19菌株(1.2×109CFU)攻毒,rGtS免疫组小鼠的存活率达50%(4/8),高于空载体对照(1/8)。【结论】本研究证实rGtS融合蛋白具有良好免疫原性,能够提供部分的保护,是一种非常有潜力的亚单位疫苗候选蛋白。
- 胡睿铭赵战勤李伦勇李增强汤细彪段龙川吴斌
- 关键词：猪链球菌免疫原性
- 长链非编码RNA CTO-S对伪狂犬病毒复制的影响被引量：1
- 2022年
- 【目的】研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响。【方法】利用3′RACE和5′RACE鉴定CTO-S的全长序列。验证CTO-S是否具有编码多肽的能力。Red重组方法构建CTO-S缺失株以及回复突变株。分析野毒株、缺失株和回复突变株复制的差异。利用RNA pull down联合质谱的方法筛选与CTO-S互作的宿主蛋白。利用RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)方法进行验证。最后利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测野毒株、缺失株和回复突变株对细胞凋亡的影响。【结果】CTO-S全长267 bp,不具有编码多肽的能力。CTO-S缺失不影响PRV的复制。CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。【结论】CTO-S对于PRV的复制是非必需的,CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。
- 苏乐段龙川段龙川付雯李林涛陈焕春陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒长链非编码RNA突变株
- 产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究
- 猪进行性萎缩性鼻炎(Swineprogressiveatrophicrhinitis，PAR)，主要是由D型产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)引起的猪的呼吸道疾病...
- 段龙川
- 关键词：产毒素多杀性巴氏杆菌沙门氏菌重组菌株生物学特性
- 猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其抗体检测ELISA方法被引量：8
- 2008年
- [目的]以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN抗体的间接ELISA方法。[方法和结果]利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN基因在大肠杆菌中进行融合表达。SDS-PAGE和Westernblot检测证实该基因获得高效表达,产物易于纯化且具有良好的免疫学活性。通过凝血酶酶切GST-PRN并回收,获得不含GST载体蛋白的PRN蛋白片段。以PRN蛋白片段为抗原建立检测天然PRN抗体的间接ELISA方法。该方法对猪巴氏杆菌病等7种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,其敏感性比乳胶凝集试验提高4～128倍,能检测到人工感染14d后的仔猪血清抗体IgG,对临床送检的1,229份猪血清的检测阳性率为32.7%。ELISA方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌。[结论]该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于猪群PRN抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查。
- 赵战勤薛云吴斌汤细彪陈焕春李增强胡睿铭张建民段龙川
- 关键词：支气管败血波氏杆菌ELISA
- 重组百日咳杆菌黏附素蛋白免疫小鼠可完全抵抗支气管败血波氏杆菌的致死性感染被引量：3
- 2008年
- 【目的】通过建立的小鼠呼吸道感染模型评价重组百日咳杆菌黏附素蛋白(GST-PRN)对小鼠的免疫保护效力。【方法和结果】在主动免疫保护试验中,GST-PRN免疫组小鼠能产生较高的PRN抗体水平,在使用3×LD50的支气管败血波氏杆菌HH0809株进行呼吸道气雾攻毒后,其保护率为100%(20/20),但载体蛋白GST和PBS对照组小鼠的存活率仅为15%(3/20)和20%(4/20)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-PRN兔抗血清能100%(10/10)保护小鼠抵抗10×LD50的HH0809株的腹腔攻击,但GST兔抗血清和PBS免疫组小鼠的存活率均为0(0/10和0/9)。【结论】研究结表明重组PRN蛋白具有良好的免疫学活性,可作为亚单位疫苗或疫苗添加成分。
- 赵战勤薛云吴斌段龙川陈焕春汤细彪胡睿铭何华李增强
- 关键词：支气管败血波氏杆菌免疫原性
