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猪源粪肠球菌Ace蛋白间接ELISA方法的建立与应用被引量：3: 2014年; 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(AF260879)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增Ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载体pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法。经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1mg/L,被检血清稀释度为1∶800,1%BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.126。交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测。; 陈丽颖张祥李晓博李英英邵刘云胡慧王亚宾; 关键词：粪肠球菌 ELISA

猪源粪肠球菌胶原蛋白黏附素(Ace)的原核表达及间接ELISA方法的建立: 肠球菌是一类球形或卵圆形，过氧化氢酶阴性，不形成芽孢，经常以单个、成对或链状排列的需氧或兼性厌氧的萃兰氏阳性球菌，其作为正常菌群主要存在于人和动物体胃肠道，也广泛分布于土壤、水等环境中，其中粪肠球菌和屎肠球菌是优势菌种。...; 张祥; 关键词：原核表达间接ELISA方法

猪源粪肠球菌含LPTXG基序样物质基因表达对其生物被膜形成的影响: 引言肠球菌是一种广泛存在于人和动物肠道内的重要人畜共患机会致病菌,而肠球菌形成生物被膜的能力与其耐药性具有重要关系,从而影响到细菌的致病力。研究发现,肠球菌具有含LXPTG基序样的蛋白如表面蛋白(Esp)、胶原蛋白黏附素...; 刘肖李晓博张祥胡慧王亚宾陈丽颖

猪唾液酸黏附素氨基端结构域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备被引量：4: 2012年; 本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1ku的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。; 张继希张志远张宜娜周永辉张祥郝一妹张元元夏平安崔保安; 关键词：克隆原核表达多克隆抗体

不同肠球菌基因组DNA提取方法对PCR鉴定的影响被引量：2: 2012年; 为研究肠球菌基因组DNA的不同提取方法对16S rRNA基因序列PCR、种属多重PCR、RAPD PCR等肠球菌鉴定结果的影响,分别采用6种基因组DNA提取方法(水煮法1、水煮法2、常规酚/氯仿抽提法、chelex-100法1、chelex-100法2和试剂盒法),对1株肠球菌标准菌株ATCC29212基因组DNA进行提取,以这些分别提取的DNA为模板在相同的扩增条件下进行PCR检测.结果表明,在16S rRNA基因序列PCR和种属多重PCR检测中以水煮法1进行肠球菌DNA的提取最适宜,而试剂盒法在RAPD PCR检测中效果最佳.; 张祥李晓博谷素美段志刚王亚宾胡慧陈丽颖; 关键词：肠球菌 DNA提取 PCR

仔猪关节炎粪肠球菌生物学特性研究被引量：10: 2011年; 从病猪肿大的跗关节中分离了1株疑似肠球菌菌株,经过常规方法进行染色特性、培养特性观察以及敏感性和致病试验,利用Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行生化特定,并用PCR方法扩增分离株的16S rRNA基因克隆测序,与GenBank上登录的相关菌株及3个粪肠球菌标准菌株进行16S rRNA序列比较、同源性分析并构建系统发育树.结果表明,该分离株形态及染色特性与肠球菌一致,对仔猪具有一定的致病性,并对临床常用的7种药物产生了耐受性;Vitek-32生化鉴定和16S rRNA基因同源性分析及比对结果均显示其为粪肠球菌.; 王亚宾张祥胡清林孟振北陈丽颖陈小丽崔保安; 关键词：粪肠球菌仔猪关节炎生物学特性

检测猪源粪肠球菌抗体的间接ELISA方法建立: 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pE...; 陈丽颖张祥刘肖张秀方武二丽张伟强胡慧王亚宾; 关键词：粪肠球菌原核表达 ELISA

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张祥