高迎
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南阳市中心医院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PvMSP1对树突状细胞分化成熟和功能的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察间日疟原虫裂殖子主要蛋白1(PvMSP1)对树突状细胞(DC)分化成熟和功能的影响,并探讨该蛋白通过Toll样受体(TLR)通路活化DC的机制。方法选择不同剂量的PvMSP1(1.0、10.0、100.0μg/ml)体外刺激人单核细胞来源的DC,采用流式细胞术分析DC成熟性相关分子CD83、CD86、HLA-DR的表达变化;ELISA检测DC培养上清中IL-10、IL-12的表达水平;RT-PCR检测DC TLR4、TLR9 mRNA的表达水平;MTT法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖的能力。同时选择未刺激的DC作为阴性对照组,LPS刺激的DC作为阳性对照组。对所得数据进行方差分析和q检验。结果与未刺激组比较,LPS诱导组CD83、CD86、HLA-DR的百分含量均增加,PvMSP1诱导组CD83、CD86、HLA-DR的表达也均升高(P均<0.05);LPS诱导组IL-10、IL-12的表达量明显增加(P<0.01),PvMSP1诱导组IL-10、IL-12的表达量也均增加(P均<0.05);LPS组DC TLR4 mRNA的表达增加(P<0.05),TLR9 mRNA的表达无明显变化(P>0.05),PvMSP1诱导组DC TLR4 mRNA的表达增加(P<0.01),TLR9 mRNA无明显变化(P>0.05);DC能够刺激自体淋巴细胞增殖。结论 PvMSP1具有促进DC分化成熟的作用,且经其诱导成熟的DC具备抗原递呈功能;PvMSP1可能经TLR4通路而非TLR9通路诱导DC成熟。
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- 关键词：间日疟原虫分化
- 间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在E.coli中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。
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- 关键词：间日疟原虫醛缩酶原核表达纯化
