王友臣
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京军区总医院更多>>
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- 腺病毒载体介导人血管内皮细胞生长因子受体－2诱导抗小鼠肝癌免疫被引量：2
- 2008年
- 目的 探讨复制缺损型腺病毒载体（Ad）介导人血管内皮细胞生长因子受体-2（hKDR）诱导抗小鼠肝癌血管免疫、打破免疫耐受的效果。方法 用RT-PCR方法从人脐静脉内皮细胞和小鼠胚胎细胞中分别克隆hKDR和小鼠KDR（mKDR），构建Ad hKDR和Ad mKDR。用Ad hKDR和Ad mKDR分别皮内免疫C57BL／6小鼠，7d后取脾细胞作为效应细胞，Hepa 1-6／mKDR作为靶细胞，行乳酸脱氢酶释放试验，检测特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤率；免疫小鼠接种Hepa 1-6肝癌细胞，观察荷瘤小鼠成活情况。结果 Ad hKDR和Ad mKDR分别免疫小鼠1周后，在效应细胞：靶细胞为100：1、50：1和25：1时，Ad hKDR诱导的6h CTL杀伤率分别为84．3％±6．7％、71．5％±5．2％和44．6％±4．7％；Ad mKDR诱导的6h CTL杀伤率分别为65．2％±6．1％、46．7％±5．0％和22．6％±3．7％。Ad hKDR免疫小鼠后1周接种5×10^6个Hepal-6肝癌细胞，2个月后仍然有60％的小鼠无瘤生长；而接种2×106个Hepal-6细胞至Ad mKDR免疫小鼠，2个月后小鼠成活率为40％。上述CTL效应和肿瘤保护作用在清除CD8^＋和CD4^＋T淋巴细胞后消失。结论 Ad介导异种KDR能有效地打破肿瘤的免疫耐受，诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应，这种特异性细胞免疫反应是CD8^＋和CD4^＋T淋巴细胞依赖性的。
- 谭晓华吴彬刘兵刘秀丽王友臣
- 关键词：T淋巴细胞细胞毒性腺病毒载体
- mCD20-腺病毒穿梭质粒pDC315的构建
- 2007年
- 目的:构建腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20重组质粒,为探讨编码mCD20基因的腺病毒载体做好准备,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法将CD20基因克隆出来,通过分子生物学技术构建过渡质粒pcDNA3.1-mCD20质粒,用PCR、酶切进行鉴定后,将该基因cDNA片段插入腺病毒穿梭质粒pDC315中,转化至高效感受态DH5a细菌细胞中进行扩增,提取质粒,获得重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20。结果:经分析鉴定,重组质粒中含有mCD20基因,达到实验预期目的。结论:成功构建表达mCD20基因的重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20,有助于后续研究构建腺病毒载体AdmCD20。
- 李慧刘兵王友臣谭晓华
- 关键词：腺病毒科质粒基因治疗
- 重组鼠CD20腺病毒载体感染的树突状细胞诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨复制缺损型腺病毒载体(adenovirus,Ad)介导的鼠CD20修饰的树突状细胞(dendritic cells,DCs)诱发抗肿瘤免疫的效果。方法:用AdmCD20感染小鼠骨髓来源的DC后,免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞行乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验,检测特异性CTL杀伤活性;并给免疫小鼠接种经过筛选后表达mCD20基因的B16/F10肿瘤细胞,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:AdmCD20/DCs免疫小鼠1周后其细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性明显强于对照组(E∶T=100∶1,t=15·3354,P<0·01;E∶T=50∶1,t=14·2327,P<0·01;E∶T=10∶1,t=8·7444,P<0·01)。AdmCD20/DCs免疫小鼠1周后接种2×105个mCD20-B16/F10肿瘤细胞,2个月后仍有50%的小鼠无肿瘤生长;而对照组3周时全部有瘤生长,χ2=8·571,P<0·01。结论:AdmCD20修饰的DCs能有效地打破机体对肿瘤的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫应答。
- 王友臣谭晓华刘兵李慧王芳
- 关键词：腺病毒科树突细胞淋巴瘤
- mCD20-腺病毒载体的构建
- 2007年
- 目的:构建编码鼠CD20(mCD20)基因的腺病毒载体,即AdmCD20重组质粒,为后续将其感染DC作为疫苗免疫小鼠做准备工作,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:实验于2006-03/2007-04在解放军北京军区总医院血液科实验室完成。运用分子生物学技术,利用本实验室保存的mCD20,以PCR凝胶电泳、酶切进行鉴定后,将该基因cDNA片段插入腺病毒穿梭质粒pDC315中,转化至高效感受态DH5a细菌细胞中进行扩增,提取质粒,获得重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20,然后采用Ad MaxTM腺病毒载体包装体系,构建Ad5/35mCD20。结果:顺序成功重组pcDNA3.1-mCD20质粒,腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20,然后采用Ad MaxTM腺病毒载体包装体系成功构建编码鼠CD20基因的腺病毒载体。结论:表达mCD20基因的腺病毒载体构建成功,此方法准确可行,为后续实验奠定基础。
- 李慧刘兵王友臣谭晓华
- 关键词：腺病毒穿梭质粒CD20重组质粒基因治疗
- 腺病毒载体介导人KDR胞外段诱导抗小鼠肝癌的免疫效应被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨复制缺陷型腺病毒载体(Ad)介导人血管内皮细胞生长因子受体-2(hVEGFR-2或hKDR)胞外段诱导抗小鼠肝癌血管免疫及打破免疫耐受的效果。方法:构建Ad hKDRE,用Ad hKDRE皮内免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞作为效应细胞(E),Hepa1-6/mKDR作为靶细胞(T),行乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测特异性CTL杀伤活性;给免疫小鼠接种肝癌细胞Hepa1-6,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:Ad hKDRE免疫小鼠1周后,在E∶T为100∶1、50∶1和25∶1时,Ad hKDRE诱导的6hCTL杀伤率分别为(81.5±5.6)%、(68.4±5.5)%和(39.6±3.9)%。Ad hKDRE免疫小鼠1周后接种2×106 Hepa1-6肝癌细胞,观察2个月无小鼠成瘤;接种5×106 Hepa1-6细胞,小鼠无瘤成活率为60%。上述CTL效应和抗成瘤作用在清除CD8+和CD4+ T淋巴细胞后消失。结论:Ad介导异种(人)KDR胞外段能有效地打破小鼠肝癌的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,这种特异性细胞免疫反应是CD4+和CD8+ T细胞依赖性的。
- 谭晓华吴彬王芳刘兵王友臣
- 关键词：异种抗原
- 编码鼠CD20腺病毒载体感染的树突状细胞诱导抗小鼠淋巴瘤免疫
- 背景和目的：
CD20阳性的B细胞淋巴瘤是临床上恶性淋巴瘤的最常见类型，目前免疫治疗在淋巴瘤的治疗中占有显著的地位。利妥昔单抗(Rituximab，美罗华)在临床上的应用显著地改善了CD20+的B细胞淋巴瘤患者...
- 王友臣
- 关键词：腺病毒载体树突状细胞诱导
- 文献传递
