张元亮
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Setd^(2−/−)急性髓系白血病小鼠模型中白血病起始细胞的转录和化疗抵抗异质性
- 2022年
- 背景与目的白血病起始细胞(leukemia-initiating cell,LIC)的异质性是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)治疗的主要障碍。越来越多的证据表明,AML中同一患者体内经常共存多种具不同致病性的LIC。然而,这些共存的LIC在药物反应性等功能方面是否存在异质性尚不明确。因此,本研究旨在阐明LIC的内在异质性以帮助预测白血病的行为以开发更有效的治疗手段。方法将原代Setd2^(-/-)-AML发病鼠的全脾细胞移植入C57BL/6受体小鼠中,建立疾病的可移植模型。采用流式细胞术对白血病小鼠进行免疫表型分析,并利用全基因组测序技术检测诱导白血病发生的二次打击事件。另外,通过连续移植实验评判Setd2^(-/-)-AML细胞的自我更新能力,进行有限稀释实验确定不同细胞亚群中的LIC频率。群体细胞和单细胞RNA测序技术被用于分析LIC的转录异质性。同时,通过小分子抑制剂筛选以及体内药物实验揭示了不同LICs亚群在药物反应方面的差异性。结果本研究中,我们观察到一只年老Setd^(2−/−)小鼠出现了AML表型,并伴有Nras^(G12S)和Braf^(K520E)共突变。进一步研究发现,此小鼠体内共存2种不同的LIC,分别富集于c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)和c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)亚群。体内移植实验揭示,这2种LIC存在分化差异。此外,转录组分析显示c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)亚群富集了阿霉素抗性相关的转录信号。后续实验证实,AML标准化疗方案阿霉素联用阿糖胞苷确实可以特异性杀伤c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)细胞,但几乎不影响c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)细胞的存活。进一步的研究显示,c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1+亚群RAS下游信号通路的激活水平高于c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)亚群,DA联合RAS通路抑制剂可同时有效杀伤这两个亚群,进而显著减缓Setd2^(-/-)-AML小鼠的疾病进展。结论本研究在Setd^(2−/−)-AML小鼠模型中鉴定到2个LIC富集群,同时揭示�
- 宋佳纯杜龙廷刘萍王福慧张波谢银银鲁静金怡周雁吕纲张建明陈赛娟陈竺孙晓建张元亮黄秋花
- 关键词：药物反应性
- 白花蛇舌草通过抑制RAP1-JNK信号通路选择性促进人肾癌ACHN细胞间质-上皮转化被引量：7
- 2019年
- 目的 :研究白花蛇舌草(Hedyotis di usa Willd,HDW)对人肾癌细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :人肾细胞腺癌ACHN和人肾近曲小管HK-2细胞经HDW处理24 h后,采用CCK-8法检测HDW对ACHN和HK-2细胞增殖的影响,FCM法检测HDW对细胞周期和凋亡的影响。光学显微镜下及罗丹明染色法观察HDW处理对ACHN和HK-2细胞形态的影响;采用免疫荧光染色法和蛋白质印迹法检测间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)相关蛋白表达的变化。划痕愈合实验和Transwell小室法检测ACHN和HK-2细胞的迁移和侵袭能力,RNA测序法检测HDW对ACHN细胞转录组的影响;实时荧光定量PCR法检测RAP1信号通路相关基因RAP1GAP、RASGRP2、RAPGEF3、MAGI1及GNAI1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK)通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phospho-JNK,p-JNK)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)表达水平的改变。结果:HDW可选择性抑制ACHN细胞增殖(P <0.01),将细胞周期阻滞于S期(P <0.01),诱导细胞凋亡(P <0.01)。HDW处理后ACHN细胞的形态发生了明显变化,HDW可促进ACHN细胞中E-钙黏蛋白1(E-cadherin 1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达,并抑制波形蛋白(Vimentin)和Snail1的表达(P值均<0.01)。HDW能显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P值均<0.01),且ACHN和HK-2细胞之间没有明显差异。RNA测序结果分析显示,HDW可影响细胞周期相关基因以及控制细胞生长的转录因子E2F和Myc靶基因的表达,并激活p53信号通路;HDW可显著下调ACHN细胞中RAP1GAP、RASGRP2、RAPGEF3、MAGI1及GNAI1 mRNA(P值均<0.000 1)和p-JNK蛋白的表达水平。结论 :HDW可能通过抑制RAP1-JNK信号通路来选择�
- 邹寒冰周雁张元亮何小珍刘培峰刘永忠
- 关键词：肾肿瘤白花蛇舌草上皮-间质转化细胞运动
- GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响
- 2013年
- 本研究探讨GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响。应用带GFP绿荧光的逆转录病毒载体介导的病毒感染实验将GATA-2基因引入小鼠胎肝细胞,通过流式免疫荧光术、细胞周期检测及集落形成实验等技术手段研究这些GATA-2过表达胎肝造血干细胞的生物学功能变化。研究结果表明:过表达GATA-2的胎肝细胞中Lin-Sca1+C-Kit+(LSK)细胞比例显著增加,LSK细胞周期未受太大影响,但其定向克隆形成能力受抑。结论:过表达GATA-2引起小鼠胎肝造血干细胞LSK比例增加,并抑制其定向分化能力,其机制可能与HES-1表达上调导致细胞在干/祖细胞阶段受阻滞有关。
- 吴婧吴博张元亮谢银银黄秋花
- 关键词：GATA-2定向分化
- miR-145靶向调控DAB2对前列腺癌PC3细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：3
- 2014年
- 已有研究表明,miR-145在多种肿瘤中低表达,并与细胞增殖和转移相关。文章通过生物信息学分析并结合体外实验鉴定,发现DAB2(Disabled homolog 2)为miR-145在肿瘤转移过程中累及的新靶点。DAB2一直被认为是一个重要的抑癌基因,在多种肿瘤标本中表达低下。然而,研究发现,在具高侵袭能力的前列腺癌细胞株PC3中DAB2基因却呈较高水平表达。另外,外源表达miR-145能显著下调DAB2表达水平,并抑制PC3细胞的迁移和侵袭能力,且这种miR-145诱导的PC3细胞功能缺陷能被DAB2过表达修复。上述结果表明,miR-145能通过靶向调控DAB2而影响高侵袭前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。
- 谢树高谢银银张元亮黄秋花
- 关键词：MIR-145
- 非平面多环芳烃[4]helicenium通过促进凋亡选择性杀伤血液恶性肿瘤细胞被引量：4
- 2020年
- 目的:研究非平面多环芳烃[4]helicenium对血液恶性肿瘤细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:用不同质量浓度的[4]helicenium(0~100μg/mL)分别处理血液恶性肿瘤Kasumi-1、HL-60、K-562、Raji和U-937细胞,采用CCK-8法检测[4]helicenium对5株细胞增殖的影响并计算对各株的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。以[4]helicenium对Kasumi-1、HL-60、Raji、K-562和U-937细胞各自的IC50为作用浓度处理后,FCM法检测[4]helicenium对细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法检测[4]helicenium对5株细胞中细胞周期相关基因细胞周期蛋白A2(cyclin A2)、cyclin B1、cyclin B2,DNA复制相关基因微小染色体维持复合体2(mini-chromosome maintenance complex 2,MCM2)、MCM3、MCM4、MCM6、GINS复合体亚基1(GINS complex subunit 1,GINS1)、GINS4、复制起始复合体亚基5(origin recognition complex subunit 5,ORC5)、核糖核苷酸小亚基M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2),DNA修复相关基因范可尼贫血互补群A(Fanconi anemia complementation group A,FANCA)、FANCB、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCG、FANCI、FANCL、FA核心复合体相关蛋白100基因(FA core complex associated protein 100,FAAP100)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测对磷酸化细胞分裂周期2(phospho-cell division cycle 2,p-CDC2)、MCM4、FANCA以及DNA损伤蛋白磷酸化组蛋白H2AX(phospho-histone H2AX,γH2AX)表达水平的影响。FCM法检测[4]helicenium对细胞凋亡的影响。结果:[4]helicenium对Kasumi-1、HL-60、Raji、K-562和U-937细胞的IC50值分别为5.659、5.786、18.700、19.860和26.970μg/mL;[4]helicenium对Kasumi-1和HL-60细胞的抑制作用最明显,其次为Raji和K-562细胞,对U-937细胞的抑制率最低。[4]helicenium可使血液恶性肿瘤细胞周期阻滞在不同阶段,Kasumi-1、HL-60和U-937细胞被阻滞在G2/M期(P值均<0.01),Raji细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.05),K-562细胞阻滞在S期(P<0.01)。[4]helicenium可明显下调Kas
- 何小珍周雁张元亮刘培峰
- 关键词：血液肿瘤DNA损伤
- 组蛋白H3K36甲基化与疾病被引量：1
- 2013年
- 组蛋白H3K36位点可以发生甲基化修饰,其修饰状态受到H3K36甲基转移酶和去甲基化酶的动态调控。H3K36的甲基化修饰可引起多种生物学效应,如参与基因的转录激活或抑制、剂量补偿以及基因的选择性剪接等。H3K36甲基化修饰状态的异常与很多疾病相关,因此全面了解H3K36甲基化对于该类疾病的诊断和治疗具有重要意义。
- 杨林森张元亮黄秋花
- 关键词：组蛋白修饰表观遗传
