崔丹
- 作品数：17 被引量：13H指数：2
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 重组鸡IL-7的制备及对法氏囊病毒灭活苗免疫原性的增强作用
- 引言传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病毒(IBDV)引起的急性、高度接触性传染病,此病发病率和死亡率高,严重威胁养鸡业的发展,目前该病尚未得到完全控制。目前主要使用弱毒苗和灭活苗进行预防,但不能完全抵抗强毒的攻击...
- 崔丹张建楼霍珊珊张永红王利月左玉柱李秀锦仲飞
- 一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法
- 本发明涉及病毒抗体制备技术领域，尤其涉及一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法。该制备方法包括如下操作：对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫，每次免疫后检测抗体滴度和中和抗体效价，当抗体滴度达到1:10000以上、中和...
- 仲飞崔丹霍珊珊张建楼左玉柱吴峰洋郑志强李妍马玉忠
- IL-15基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：1
- 2016年
- 为弄清犬白介素-15(cIL-15)能否增强犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究首先通过RT-PCR方法从犬脾脏淋巴细胞中扩增全长cIL-15cDNA基因,并构建其与Myc-His-tag融合和非融合的表达载体:pcDNA-cIL-15/MH和pcDNA-cIL-15。将pcDNA-cIL-15/MH载体转染HEK293T细胞,确定构建的表达载体能否介导cIL-15进行分泌表达。利用过去构建的VP2表达载体和pcDNA-cIL-15载体共免疫小鼠,用ELISA检测免疫后小鼠血清中的抗体滴度,并用MTT检测小鼠淋巴细胞的增殖活性和用ELISA测定淋巴细胞干扰素-γ和IL-4的表达。结果显示,构建的cIL-15表达载体能够介导cIL-15在真核细胞中的分泌表达。用VP2和cIL-15表达载体共免疫小鼠,抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01)。当免疫35d时,共免疫组淋巴细胞的刺激指数、干扰素-γ和IL-4的表达水平均明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。结果表明,cIL-15可明显增强VP2DNA疫苗的免疫原性。
- 霍珊珊李楠吴峰洋崔丹张建楼张永红徐建仲飞
- 关键词：免疫佐剂犬细小病毒
- 密码子优化提高猪IL-7在HEK293T细胞表达的研究被引量：5
- 2017年
- 为提高重组猪白细胞介素-7(pIL-7)在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达,依据人偏爱的密码子对pIL-7基因进行了优化修饰,然后用pcDNA3.1A质粒构建其与Myc/His-标签融合的真核表达载体。将此表达载体和过去构建的野生型pIL-7表达载体分别转染HEK293T细胞进行表达,利用镍-琼脂糖凝胶颗粒从培养基中纯化表达的重组pIL-7,比较二者的表达水平。结果显示,密码子优化后pIL-7基因在HEK293T细胞中的表达水平为(45±3.2)μg/T25细胞瓶,比野生型pIL-7基因的表达水平(21±1.8)μg/T25细胞瓶,提高了2倍多,可见密码子优化可明显提高重组pIL-7在HEK293T细胞中的表达。这为猪IL-7的生物学功能的研究提供了必要条件。
- 崔丹温洁霞霍珊珊张建楼左玉柱仲飞
- 关键词：密码子优化真核细胞
- 实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展
- 实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,该技术融汇了传统...
- 张永红郑志强霍珊珊崔丹仲飞
- 关键词：荧光染料荧光探针分子信标
- 猪肺泡/羊水表面活性蛋白A的分离纯化及抗菌和抗病毒活性的分析被引量：2
- 2017年
- 为探讨猪肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的抗菌和抗病毒活性,需要从猪肺泡液和羊水中分离纯化SP-A。首先通过化学交联法将麦芽糖共价交联在Sepharose胶粒上,制成能够与SP-A结合的胶粒,即麦芽糖-Sepharose(MS)。采集肺泡灌洗液(BLAF)和羊水(AF),以11 000r/min转速离心40 min获得富含SP-A的沉淀;将沉淀溶解于含8mol/L尿素的缓冲液I中使SP-A变性,再以无尿素的缓冲液I透析使其复性。然后在含Ca2+的结合缓冲液中用MS吸附SP-A,用含EDTA的洗脱液洗脱,洗脱的SP-A过Sephadex G-75凝胶柱得到纯化的SP-A。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示:在相对分子质量为35 000和70 000处出现特异的SP-A蛋白带(或杂交带)。菌体凝集试验显示:SP-A具有凝集E.coli的作用,表明制备的SP-A具有生物活性。抑菌试验证实SP-A对致病性E.coli、肠沙门杆菌、肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的增殖均有不同程度的抑制作用,特别是对E.coli和肠沙门杆菌抑制作用更为明显。抗病毒检测结果显示:SP-A可明显抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在MARC-145细胞中的增殖,同时对猪细小病毒(PPV)在PK-15细胞中的增殖也有一定的抑制作用。结果表明:制备的猪SP-A在体外具有明显的抗菌和抗病毒活性,这为以后进一步研究猪SP-A的生物学特性及抗菌、抗病毒活性提供了必要的条件。
- 张永红霍珊珊张建楼徐建左玉柱王利月崔丹李秀锦仲飞
- 关键词：抗病毒活性
- 一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法
- 本发明涉及病毒抗体制备技术领域，尤其涉及一种驴源犬瘟热病毒免疫球蛋白G的制备方法。该制备方法包括如下操作：对青年健康驴用犬瘟热灭活疫苗接种免疫，每次免疫后检测抗体滴度和中和抗体效价，当抗体滴度达到1:10000以上、中和...
- 仲飞崔丹霍珊珊张建楼左玉柱吴峰洋郑志强李妍马玉忠
- 重组鸡白细胞介素-7在HEK293T细胞中的表达及其条件分析被引量：1
- 2016年
- 为提高重组鸡白细胞介素-7(chIL-7)在真核细胞中的表达水平,本试验分析了影响基因表达的一些因素,包括转染方法、质粒用量、转染时间及表达时间等,对重组chIL-7表达水平的影响,并通过正交试验设计方法确定了利用HEK293T细胞表达重组chIL-7的最适表达条件。结果表明,在T75细胞瓶中,由脂质体介导使用30μg质粒,转染4h,表达48h和由磷酸钙介导使用40μg质粒,转染6h,表达60h可以获得较高的表达效率,表达水平分别为(124±9)和(94.3±8)μg/106个细胞。本结果为进一步研究chIL-7的功能提供有利条件。
- 霍珊珊王利月张永红张建楼徐建崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：正交试验
- 猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立被引量：1
- 2016年
- 猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。
- 徐建霍珊珊张建楼张永红崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：CHO-K1细胞流式细胞术
- CD163受体在PRRSV感染过程中作用机制的研究进展
- CD163是一种清道夫受体(scavenger receptor)超家族成员,由吞噬细胞表达.CD163不仅与内源性配体结合,调节炎症反应.还能作为细菌、病毒的受体,与外源性配体结合.在PRRSV感染宿主细胞的过程中,C...
- 崔丹张永红霍珊珊仲飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征清道夫受体
