黄威
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 突变型乙肝病毒核心抗原DNA疫苗的体外表达
- 2013年
- 目的:构建突变型核心抗原核酸疫苗,观察该核酸疫苗在体外蛋白的表达。方法:采用基因工程定点突变技术,构建5种突变型核酸疫苗,分别去除乙肝病毒核心抗原N端的第1、2位氨基酸,命名为M12,去除3、4位氨基酸命名为M34以及去除5、6位的氨基酸命名为M56,用上述构建的核酸疫苗与野生型HBc核酸疫苗(pJW4303/HBc)及空载体质粒pJW4303分别用脂质体转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测核心蛋白的表达。结果:经过pst1和BglII双酶切和测序鉴定结果突变型核心抗原核酸疫苗构建成功。在去除2个氨基酸的核酸疫苗结果中显示:野生型pJW4303/HBc、M12、及M56体外转染293T细胞后,在细胞上清和裂解中能很好的表达,而M34上清未见表达,仅裂解中可见极少量疑似表达条带;在原有基础上分别去除第3位和第4位氨基酸,命名为M3和M4,结果显示M3上清未见表达,裂解液中可见少量表达,而M4在上清和裂解中均可见明显的表达。结论:去除核心抗原N端第3位的氨基酸(M3)可以明显影响核心抗原的表达,HBcAg氨基端第3位氨基酸对蛋白的表达可能起到重要的作用。
- 王文娟邢益平黄威李军黄祖瑚
- 关键词：突变型乙肝核心抗原核酸疫苗
- 一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法
- <正>目的针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作...
- 黄威邢益平严友德严玉娟艾月梅
- 文献传递
- 一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法被引量：2
- 2014年
- 目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物。用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱。并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较。结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99%)。随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100%、90%和80%。常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA。结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100%,且灵敏度优于常规real-time PCR法。
- 黄威邢益平严有德严玉娟艾月梅
- 关键词：结核分支杆菌RAPDPCR
- 突变型乙肝病毒核心抗原DNA疫苗的体外表达
- 目的构建突变型核心抗原核酸疫苗,观察核心抗原氨基端第1-6位氨基酸对蛋白表达的影响及其意义。方法采用基因工程定点突变技术,构建5种突变型核酸疫苗,分别去除乙肝病毒核心抗原N端的第1、2位氨基酸,命名为M12,去除3、4位...
- 王文娟邢益平黄威李军黄祖瑚
