张峥嵘
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))在MCF7细胞中的可诱导表达并引起F-actin的重分布被引量：2
- 2017年
- 目的使用四环素操纵子(Tet-on)可控表达系统研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))对MCF7乳腺癌细胞形态及细胞骨架的影响。方法以p16^(INK4a)表达缺失的MCF7乳腺癌细胞为宿主细胞,用慢病毒通过"两步感染法"建立MCF7-p Tet-on-p16^(INK4a)可诱导表达细胞系,加入诱导剂强力霉素(Dox)诱导目的基因表达;细胞计数检测细胞生长变化;采用免疫细胞化学染色检测上皮钙黏素(E-cadherin)表达,采用鬼笔环肽(phalloidin)标记纤维型肌动蛋白(F-actin),观察p16^(INK4a)对细胞间黏附连接、细胞骨架的影响;用显微镜对细胞拍照后,用Image J软件进行形态分析。结果成功建立了可诱导表达p16^(INK4a)的MCF7稳定细胞系,Dox可以有效诱导p16^(INK4a)的表达;诱导条件下稳定表达p16^(INK4a)的MCF7细胞增殖受抑制,细胞体积增大,轮廓线延长;而对照MCF7细胞F-actin主要定位于胞质,p16^(INK4a)表达的细胞内F-actin向细胞边缘分布增加。结论 p16^(INK4a)在MCF7细胞中的表达可以导致细胞体积增大、细胞间黏附连接弱化、F-actin向细胞外周重新分布。
- 梁剑青王嫚娜张峥嵘袁龙郑幽黄红艳孙强王菊芳王小宁
- 关键词：P16INK4AF-ACTIN
- CD19蛋白截短体慢病毒表达载体的构建及其在K562细胞中的表达
- 2017年
- 目的:构建胞内段缺失的CD19蛋白截短体(CD19t)慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro,并建立稳定表达CD19t的人红白血病细胞系K562/CD19t。方法:合成CD19t基因全长,酶切产物插入慢病毒载体pLVXEF1α-IRES-Puro,将重组质粒转染293FT细胞包装病毒后感染人红白血病细胞系K562,采用Western印迹和免疫荧光技术检测CD19t在K562细胞中的表达,并通过ELISA检测K562/CD19t与CD19 CAR-Jurkat共培养上清中的IL-2浓度。结果:酶切鉴定与测序结果表明成功构建慢病毒表达载体p LVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro;Western印迹和免疫荧光检测到K562/CD19t细胞中CD19t的表达;ELISA结果显示表达的CD19t能够刺激识别CD19的CAR-Jurkat细胞分泌IL-2。结论:构建了CD19蛋白截短体慢病毒表达载体,并在K562细胞中表达,有助于进一步构建B细胞白血病动物模型和验证CAR-T效能。
- 张峥嵘张峥嵘梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：CD19B细胞
- RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位
- 2017年
- 目的:构建RRAGD-EGFP融合基因表达载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,并检测RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位。方法:提取HEK293细胞总RNA,逆转录得到cDNA并扩增RRAGD基因,克隆入逆转录载体pQCXIP-EGFP-N1,病毒包装后感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436,活细胞观察其在细胞内的表达定位。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,融合蛋白RRAGD-EGFP定位于胞浆囊泡和细胞核。结论:RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中表达定位于胞浆囊泡,与其参与溶酶体调节功能一致,为后续分析RRAGD在cell-in-cell中的作用奠定了基础。
- 张峥嵘张峥嵘阮班展王嫚娜梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：基因克隆
