梁剑青
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))在MCF7细胞中的可诱导表达并引起F-actin的重分布被引量：2
- 2017年
- 目的使用四环素操纵子(Tet-on)可控表达系统研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^(INK4a))对MCF7乳腺癌细胞形态及细胞骨架的影响。方法以p16^(INK4a)表达缺失的MCF7乳腺癌细胞为宿主细胞,用慢病毒通过"两步感染法"建立MCF7-p Tet-on-p16^(INK4a)可诱导表达细胞系,加入诱导剂强力霉素(Dox)诱导目的基因表达;细胞计数检测细胞生长变化;采用免疫细胞化学染色检测上皮钙黏素(E-cadherin)表达,采用鬼笔环肽(phalloidin)标记纤维型肌动蛋白(F-actin),观察p16^(INK4a)对细胞间黏附连接、细胞骨架的影响;用显微镜对细胞拍照后,用Image J软件进行形态分析。结果成功建立了可诱导表达p16^(INK4a)的MCF7稳定细胞系,Dox可以有效诱导p16^(INK4a)的表达;诱导条件下稳定表达p16^(INK4a)的MCF7细胞增殖受抑制,细胞体积增大,轮廓线延长;而对照MCF7细胞F-actin主要定位于胞质,p16^(INK4a)表达的细胞内F-actin向细胞边缘分布增加。结论 p16^(INK4a)在MCF7细胞中的表达可以导致细胞体积增大、细胞间黏附连接弱化、F-actin向细胞外周重新分布。
- 梁剑青王嫚娜张峥嵘袁龙郑幽黄红艳孙强王菊芳王小宁
- 关键词：P16INK4AF-ACTIN
- CD19蛋白截短体慢病毒表达载体的构建及其在K562细胞中的表达
- 2017年
- 目的:构建胞内段缺失的CD19蛋白截短体(CD19t)慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro,并建立稳定表达CD19t的人红白血病细胞系K562/CD19t。方法:合成CD19t基因全长,酶切产物插入慢病毒载体pLVXEF1α-IRES-Puro,将重组质粒转染293FT细胞包装病毒后感染人红白血病细胞系K562,采用Western印迹和免疫荧光技术检测CD19t在K562细胞中的表达,并通过ELISA检测K562/CD19t与CD19 CAR-Jurkat共培养上清中的IL-2浓度。结果:酶切鉴定与测序结果表明成功构建慢病毒表达载体p LVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro;Western印迹和免疫荧光检测到K562/CD19t细胞中CD19t的表达;ELISA结果显示表达的CD19t能够刺激识别CD19的CAR-Jurkat细胞分泌IL-2。结论:构建了CD19蛋白截短体慢病毒表达载体,并在K562细胞中表达,有助于进一步构建B细胞白血病动物模型和验证CAR-T效能。
- 张峥嵘张峥嵘梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：CD19B细胞
- RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位
- 2017年
- 目的:构建RRAGD-EGFP融合基因表达载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,并检测RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位。方法:提取HEK293细胞总RNA,逆转录得到cDNA并扩增RRAGD基因,克隆入逆转录载体pQCXIP-EGFP-N1,病毒包装后感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436,活细胞观察其在细胞内的表达定位。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,融合蛋白RRAGD-EGFP定位于胞浆囊泡和细胞核。结论:RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中表达定位于胞浆囊泡,与其参与溶酶体调节功能一致,为后续分析RRAGD在cell-in-cell中的作用奠定了基础。
- 张峥嵘张峥嵘阮班展王嫚娜梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：基因克隆
- CDKN2A基因表达抑制同质cell-in-cell结构形成的研究
- Cell-in-cell是指一个或多个结构和功能上完整的活细胞存在于另一个细胞胞浆内部,形成的细胞套细胞的现象。Cell-in-cell结构在体内常见于多种同质肿瘤细胞间,且与肿瘤的临床转归密切相关。近年来,染色体异常被...
- 梁剑青
- 关键词：CDKN2A细胞骨架肿瘤
- 文献传递
- 原钙黏蛋白7b与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在MCF10A细胞中的表达定位
- 2016年
- 目的:构建原钙黏蛋白7b(PCDH7b)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因表达载体pQCXIP-PCDH7b-EGFP,并检测PCDH7b-GFP融合蛋白在细胞中的表达定位。方法:以MDA-MB-436细胞基因组DNA为模板,PCR扩增人PCDH7b基因,克隆入逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-N1构建pQCXIP-PCDH7b-EGFP,病毒包装后感染人乳腺上皮细胞系MCF10A,免疫荧光染色检测其与膜蛋白E钙黏蛋白的相对表达定位。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-PCDH7b-EGFP,融合蛋白PCDH7b-GFP定位于细胞浆和细胞膜,与E钙黏蛋白有共定位。结论:PCDH7b-GFP融合蛋白的表达,为后续活细胞成像分析PCDH7b在细胞内的动态分布奠定了基础。
- 陈昂袁龙张峥嵘梁剑青闫敏李世崇王启伟孙强刘真真管静芝陈昭烈
- 关键词：基因克隆亚细胞定位
- 低稳定性绿色荧光蛋白EGFP-PEST的载体构建及表达验证被引量：1
- 2017年
- 目的:构建含有蛋白降解基序PEST序列的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达载体pQCXIP-EGFPPEST-N1,并检测其对蛋白稳定性的调节。方法:以NFATx6-mPro-EGFP-PEST-YES为模板,PCR扩增EGFP-PEST序列,克隆入逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-N1构建pQCXIP-EGFP-PEST-N1,病毒包装后感染293FT细胞获得稳定细胞系;用蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞,Western印迹检测EGFP的表达变化。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-PEST-N1,感染293FT细胞后,与对照组相比,EGFP表达显著降低,并且该降低可被MG-132处理逆转。结论:构建了EGFP-PEST蛋白的表达载体,PEST可以介导EGFP蛋白发生蛋白酶体依赖的降解。为实现基因编辑效果的可视化筛选奠定了基础。
- 袁龙郑幽范杰梁剑青梁剑青高丽华高丽华陈昭烈陈昭烈管静芝
- 关键词：蛋白酶体绿色荧光蛋白
