王敬敬
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：华南理工大学轻工与食品学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 小麦蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及重组酶性质被引量：3
- 2017年
- 目的:克隆小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI)基因,实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质。方法:以小麦种子总RNA为模板,逆转录并扩增得到wpdi,并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌进行原核表达,表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究。结果:克隆的基因全长1 548 bp,与"Wyuna"品种小麦wpdi基因相似性达99%。构建了pET-30b-wpdi表达载体,获得w PDI的最佳表达条件为:诱导温度22℃,诱导时间6 h,诱导剂浓度0.5 mmol/L。该酶含4个硫氧还蛋白结构域,分子质量约为66.2 kD,具有二硫键的还原酶和异构酶活性以及分子伴侣活性。结论:对重组wPDI的表达和酶学性质研究,为wPDI在面制品加工及其他方面的应用提供参考依据。
- 刘光胡松青张婷婷王敬敬李琳侯轶
- 关键词：克隆酶学性质
- 高分子量麦谷蛋白亚基N端结构域的可溶性及其聚集行为研究
- 为了充分认识高分子量麦谷蛋白亚基N端结构域,研究了高分子量麦谷蛋白亚基1Dx5的N端结构域(1Dx5-N)的理化性质和聚集行为。运用Native-PAGE,还原/非还原SDS-PAGE,内源荧光光谱,分子排阻色谱(SEC...
- 王敬敬刘光毅刘光侯轶胡松青
- 关键词：高分子量麦谷蛋白亚基N端结构域
- 小麦蛋白质二硫键异构酶的毕赤酵母表达及重组酶性质研究被引量：2
- 2017年
- 为开发天然健康的酶制剂型面粉改良剂,利用毕赤酵母表达了小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI)。以克隆质粒pMD19-T-wpdi为基因模板,亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,并以毕赤酵母GS115为宿主菌进行真核表达,表达产物经硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化后,与大肠杆菌重组wPDI的酶学性质进行了比对,并利用粉质仪探究了重组wPDI对面粉品质的影响。结果表明,克隆的wpdi基因含有1347个碱基,共编码449个氨基酸,分子量约为50.2 ku。Western blot结果显示,构建的重组酵母表达系统成功表达了重组wPDI;阴离子交换层析获得的wPDI的酶学性质研究表明,酵母重组wPDI表现出了二硫键氧化还原活性和分子伴侣活性,其还原活性高于大肠杆菌重组wPDI,氧化活性和分子伴侣活性低于大肠杆菌重组wPDI。粉质实验结果表明,相对于大肠杆菌重组wPDI,酵母重组wPDI表现出了更强的弱化面粉加工品质能力。研究结果为wPDI的深入研究及其在面制品中的应用奠定了基础。
- 曹佩卫娜刘光王敬敬徐勇胡松青
- 关键词：毕赤酵母克隆表达粉质特性
- 重组小麦蛋白质二硫键异构酶的不同生物活性对面粉加工品质的影响研究
- 小麦蛋白质二硫键异构酶(wPDI)参与了小麦蛋白质的生物合成。为了探究wPDI的酶学活性和分子伴侣活性对面粉加工品质的影响规律,本研究制备了重组wPDI(同时具有酶学活性和分子伴侣活性),截短蛋白AB(仅具有氧化活性),...
- 刘光王敬敬李琳胡松青
- 关键词：酶学活性面包质量
- pH对小麦HMW-GS 1Dx5的N端结构域分子特性的影响
- 2016年
- 采用内源荧光光谱、总自由巯基定量、非还原和还原十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及原子力显微镜(AFM)等方法探究了pH值对高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Dx5的N端结构域(1Dx5-N)聚集体形成的影响规律.结果显示:与酸性和碱性条件下相比,中性(pH=7.0)条件下,1Dx5-N的荧光最大发射波长发生了蓝移,表明中性条件下1Dx5-N聚集程度增加;与酸性和碱性处理条件相比,中性条件下1Dx5-N的总自由巯基含量降低,且形成了更多的二聚体和高聚体,表明中性环境更有利于1Dx5-N的聚集,且分子间二硫键对聚集体的形成发挥了重要作用;中性条件下形成了颗粒直径相对较大的聚集体,进一步证明了中性条件更有利于1Dx5-N的聚集.从而从分子层面证明了中性条件下进行面制品加工的合理性.
- 胡松青张亚萍王敬敬刘光毅黄滟波李琳侯轶
- 关键词：高分子量麦谷蛋白亚基N端结构域聚集体
