李佳俊
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：苏州大学医学部药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 构建MDCK Ⅱ-hMDR1-hCYP3A4共表达体系
- 2017年
- 构建MDCK-hMDR1-CYP3A4双转表达体系,研究CYP3A4和P-gp之间的相互作用。根据基因文库合成CYP3A4基因编码片段,连接到pc DNA3.1/Hypgro表达载体,进行测序。验证正确的重组质粒pc DNA3.1/Hypgro/h CYP3A4转染MDCK-MOCK细胞以及MDCK-hMDR1细胞,经潮霉素B(Hygromycin B)加压筛选阳性克隆,获得稳定高表达人CYP3A4的MDCK-h CYP3A4单转以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转稳转细胞株。结果显示相比于空白细胞(MDCK-MOCK)以及阴性细胞(MDCK-MDR1),CYP3A4在MDCK-h CYP3A4、MDCK-hMDR1-h CYP3A4细胞中的表达更稳定并且活性显著增强。MTT结果表明,在MOCK、MDCK-MDR1、MDCK-CYP3A4以及MDCK-MDR1-CYP3A4 4种细胞系中,苏尼替尼的IC_(50)值分别为2.832,5.717,3.628,6.561μmol/L,而伯舒替尼的IC_(50)值分别为0.712 6,4.413,2.184,7.010μmol/L。由于苏尼替尼和博苏替尼是CYP3A4以及P-gp的共同底物,CYP3A4的代谢活性以及P-gp的外排功能共同作用使得苏尼替尼和博苏替尼毒性降低,因而MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株IC_(50)值比MDCK-hMDR1、MDCK-h CYP3A4明显增大。以上结果说明了构建的稳定单转MDCK-h CYP3A4以及MDCK-hMDR1-h CYP3A4双转细胞株是具有功能的,并且CYP3A4与P-gp之间的作用是相互影响的,同时该模型的建立也为药物的转运与代谢研究提供更全面的研究技术与思路。
- 黄洁琼徐云婷李佳俊汪维鹏张洪建
- 关键词：P-糖蛋白共表达细胞毒性
- 达比加群在家兔中的药代动力学及其对实验室检查的影响被引量：2
- 2019年
- 目的通过在新西兰大白兔中单剂量服用达比加群酯,对比不同时间点的达比加群血药浓度变化、不同血药浓度时的实验室检查结果,探讨达比加群的药代动力学特征及其对实验室检查结果的影响。方法 18只新西兰大白兔采用随机数字表法分为5 mg/kg组、10 mg/kg组和对照组三组,每组6只,分别灌胃5 mg/kg、10 mg/kg达比加群酯溶液和等体积的溶剂,于给药前,给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h取血,通过液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测达比加群血药浓度计算药代动力学参数并分析组间差异;通过检测达比加群浓度(蛇静脉酶发色底物法测定,ECA)、部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT),与LC-MS/MS结果做相关性分析,同时对ECA与LC-MS/MS进行Bland-Altman偏倚性分析。结果达比加群在各实验组中药代动力学参数:5 mg/kg组:t_(max)=(2.42±0.66)h、C_(max)=(131.07±49.95)ng/mL、AUC_(0→t)=(814.56±366.86)ng·h^(-1)·mL^(-1)、AUC_(0→∞)=(902.79±426.86)ng·h^(-1)·mL^(-1)、MRT=(5.69±1.74)h、t_(1/2)=(8.12±1.98)h;10 mg/kg组:t_(max)=(2.83±1.13)h、C_(max)=(309.99±189.12)ng/mL、AUC_(0→t)=(1 732.26±605.15)ng·h^(-1)·mL^(-1)、AUC_(0→∞)=(1887.63±616.99)ng·h^(-1)·mL^(-1)、MRT=(5.69±1.83)h、t_(1/2)=(8.47±2.87)h,两实验组t_(max)、MRT和t_(1/2)均差异无统计学意义(P>0.05)。实验室检查结果:与对照组相比,给药后TT-时间曲线随药-时曲线有类似的变化。APTT与达比加群呈低度相关(R^2=0.224);TT与达比加群浓度呈高度相关(R^2=0.780)但有过高的敏感性;ECA检测达比加群的血药浓度呈高度相关(R^2=0.882),Bland-Altman偏倚性分析提示ECA低估药物浓度。结论达比加群的药代动力学是可预测的且在体内抗凝效果无时间延迟;APTT不适合作为定量检测达比加群的指标,但其值显著升高提示高浓度的达比加群;TT可作为达比加群的定性指标;ECA可在一定程度上作为达比加群定量的指标
- 张培哲曹邦明李佳俊张弛夏明杨向军
- 关键词：达比加群药代动力学部分凝血酶原时间凝血酶时间
- CYP2C8及CYP3A4细胞表达体系的构建及其在小分子激酶药物对紫衫醇代谢途径抑制研究中的应用被引量：1
- 2016年
- 构建CYP2C8及其3种突变体细胞表达体系,以紫杉醇为底物研究CYP2C8基因多态性对其酶活性的影响,以及构建CYP2C8和CYP3A4共转染细胞体系研究小分子激酶抑制剂对紫杉醇代谢途径的抑制。根据基因文库分别合成CYP3A4以及CYP2C8及其3种突变体CYP2C8*2(805A>T)、CYP2C8*3(416G>A,1196A>G)、CYP2C8*4(792C>G)的基因编码片段,将其连接到PEGFP-N1表达质粒,测序验证。将CYP2C8野生型及其突变体分别转染HepG2细胞,24 h后加入紫杉醇进行孵育,通过建立好的LC-MS/MS方法对代谢物进行定量分析。同时,也将野生型CYP2C8和CYP3A4质粒按一定的浓度比转入Hep G2细胞构建共表达体系。并筛选出合适的质粒浓度比转染细胞,在加入紫杉醇孵育时,同时加入小分子激酶抑制剂,考察小分子激酶抑制剂对紫杉醇代谢途径的抑制作用。结果表明,CYP2C8*4代谢酶对紫杉醇的代谢能力存在明显差异,其中CYP2C8*2和CYP2C8*3代谢活性分别是野生型的81%(P<0.05)和87%(P<0.05),而CYP2C8*4则是野生型的65%(P<0.01)。尼洛替尼完全抑制了紫杉醇的代谢,阿法替尼对紫杉醇的两条代谢途径抑制达30%,而伊马替尼选择性抑制了CYPD3A4的活性。不同基因型CYP2C8对紫杉醇的代谢存在差异,可能是导致临床疗效不同的原因。小分子激酶抑制剂在与紫杉醇联合使用时,对紫杉醇代谢的抑制各不相同。
- 李远黄洁琼李佳俊汪维鹏张洪建
- 关键词：代谢酶药物相互作用
