戴佩
- 作品数:8 被引量:4H指数:2
- 供职机构:南华大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 利用膜蛋白酵母双杂交系统构建人尿道上皮细胞cDNA文库
- 2018年
- 利用基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交技术,构建人永生尿道上皮细胞(SV-HUC-1) cDNA文库。Trizol法提取人尿道上皮细胞总RNA,并分离纯化其mRNA;以mRNA为模板,合成cDNA第一链、第二链;通过T4 DNA聚合酶将DNA链两端加上5'接头;并将其大于1 kbp的片段与膜蛋白酵母双杂交载体p PR3-N连接,经电转化大肠杆菌感受态细胞,以构建基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并检测文库的库容量和随机性。本研究成功构建了人尿道上皮细胞的基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,为进一步研究泌尿生殖道感染病原体与宿主尿道上皮细胞的相互作用奠定了实验基础。
- 李玲玲余敏君邓湘赢戴佩朱翠明罗丹廖雅婷曾焱华
- 关键词:CDNA文库
- 与生殖支原体MgPa相互作用的受体蛋白及其分离方法和用途
- 本发明筛选得到了位于人尿道上皮细胞膜表面的受体蛋白——组蛋白H2B。所述蛋白分离自人尿道上皮细胞的细胞膜蛋白,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,由126个氨基酸组成。本发明利用改进的VOPBA方法筛选MgPa在人...
- 游晓星邓湘赢戴佩
- 利用酵母双杂交技术筛选与生殖支原体黏附蛋白(MgPa)相互作用的宿主蛋白被引量:2
- 2019年
- 从利用基于分离的泛素介导膜蛋白酵母双杂交系统构建的人尿道上皮细胞cDNA文库中筛选生殖支原体(Mg)黏附蛋白(MgPa)的互作蛋白。以pET30a-MgPa为模板,经PCR扩增MgPa基因,将其分别连接到pBT3STE和pBT3SUC载体以构建诱饵质粒pBT3STE-MgPa和pBT3SUC-MgPa;将诱饵质粒分别转化到酵母菌株NMY32内,检测其毒性和自激活活性;将人尿道上皮细胞cDNA文库质粒pPR3-N-207-Zeng转入到含pBT3SUC-MgPa诱饵质粒的酵母菌株中,筛选阳性克隆。检测阳性克隆LacZ报告基因的活性。提取阳性克隆质粒进行DNA测序与BLAST分析。结果显示,成功构建的诱饵质粒pBT3STE-MgPa和pBT3SUC-MgPa两者都没有自激活功能,且pBT3SUC-MgPa的活性强于pBT3STE-MgPa。用pBT3SUC-MgPa转化NMY32酵母作为受体酵母细胞。经DNA测序与BLAST分析结果表明筛选到的28个阳性克隆归属于23个不同的蛋白。从利用分离的泛素介导膜蛋白酵母双杂交系统构建的人尿道上皮细胞cDNA文库中筛选到23个与MgPa相互作用的蛋白,为阐明MgPa的功能及Mg可能的致病机制提供参考。
- 王磊李冉辉李冉辉戴佩戴佩李玲玲罗丹
- 关键词:生殖支原体黏附蛋白酵母双杂交CDNA文库
- 生殖支原体黏附蛋白MgPa互作蛋白的筛选与鉴定及其功能的初步研究
- 生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)是一类缺乏细胞壁、能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。其主要黏附蛋白MgPa(M.genitaliumprotein of adhesion,M...
- 戴佩
- 关键词:生殖支原体致病机制蛋白功能
- 与结核病阳性血清特异结合的多肽以及诊断试剂盒
- 本发明提供了一种能够与结核病阳性血清特异结合的多肽,所述的多肽为A和B中的一种或两种的组合,其中A的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,B的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了一种结核病血清学诊断试...
- 曾焱华王丽邓湘赢戴佩
- 从T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白的互作蛋白被引量:2
- 2018年
- 目的:从人尿道上皮细胞(SV-HUC-1)T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白(MgPa)的互作蛋白。方法:以原核表达、纯化的重组生殖支原体黏附蛋白(r Mg Pa)为靶分子,对人尿道上皮细胞T7噬菌体展示cDNA文库进行4轮生物淘选,采用T7特异性引物扩增阳性克隆的插入片段,PCR产物测序后进行BLAST分析,间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot检测阳性噬菌体与rMgPa的特异结合。结果:经过4轮生物淘选,噬菌体克隆富集明显;DNA测序后经BLAST比对分析,结果表明随机挑取的32个阳性克隆包括7种不同序列,其中以RPL35重复次数最多;间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot结果表明7个代表性噬菌体均能与rMgPa特异结合。结论:60S核糖体蛋白L35(RPL35)可能是MgPa的互作蛋白,为深入了解MgPa的生物学功能以及生殖支原体的致病机制奠定了实验基础。
- 戴佩邓湘赢余敏君李玲玲罗丹龙娴曾焱华
- 关键词:生殖支原体
- 与生殖支原体MgPa相互作用的受体蛋白及其分离方法和用途
- 本发明筛选得到了位于人尿道上皮细胞膜表面的受体蛋白——组蛋白H2B。所述蛋白分离自人尿道上皮细胞的细胞膜蛋白,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,由126个氨基酸组成。本发明利用改进的VOPBA方法筛选MgPa在人...
- 游晓星邓湘赢戴佩
- 文献传递
- 与结核病阳性血清特异结合的多肽以及诊断试剂盒
- 本发明提供了一种能够与结核病阳性血清特异结合的多肽,所述的多肽为A和B中的一种或两种的组合,其中A的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,B的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了一种结核病血清学诊断试...
- 曾焱华王丽邓湘赢戴佩
- 文献传递