付琛颖
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广州市科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IgE低亲和力受体基因的克隆、表达及初步鉴定
- 2010年
- 目的利用基因重组的方法建立IgE低亲和力受体(FcεRⅡ)基因的原核表达系统。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞扩增FcεRⅡcDNA基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建原核表达载体FcεRⅡ-pGEX-4T-1,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,诱导表达FcεRⅡ蛋白,通过割胶回收纯化,并用Western blot检测FcεRⅡ的表达。结果测序表明所扩增FcεRⅡcDNA基因,与已报道的序列一致。获得的重组蛋白经Western blot鉴定可以和人IgE特异性结合。结论成功构建了FcεRⅡ-pGEX-4T-1表达载体,获得了能和人IgE特异性结合的重组蛋白,为下一步FcεRⅡ单克隆抗体的制备及应用研究打下了基础。
- 尹晴陈白虹邱国真付琛颖董文其魏威李珍朱勇王萍
- 关键词：IGE
- 人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析被引量：1
- 2009年
- 目的通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgE Cε3-Cε4-pET28a(+)表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基特异性识别的IgE Cε3-Cε4区蛋白,并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础。
- 付琛颖曲戎梅邱国真魏威林志斌王萍王文敬李珍董文其
- 关键词：IGE
- 广州管圆线虫病发病机制的研究现状
- 2010年
- 广州管圆线虫病是重要的食源性人兽共患寄生虫病,其临床表现多样,可侵犯中枢神经系统、肺部、眼部、乙状结肠等多处脏器。广州管圆线虫入侵宿主造成损伤的机制,认为与多种因素共同作用有关,血脑屏障功能障碍、中枢神经系统功能障碍、免疫反应等均参与其中。了解其发病机制对临床诊断和治疗该病有指导性意义。
- 李莹付琛颖汤金萍董文其
- 关键词：广州管圆线虫病发病机制中枢神经系统功能障碍免疫反应
- 人源脂肪细胞SH2B1β基因的克隆表达
- 2009年
- 目的获取人源脂肪细胞SH2B1β基因序列,构建SH2B1β-pET28a(+)重组表达质粒,在大肠杆菌中对其进行表达。方法利用RT-PCR方法从人源分化成熟的脂肪细胞RNA中扩增出SH2B1β的cDNA片段,并插入pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达带6×His标签的融合蛋白。结果PCR和酶切电泳鉴定结果显示SH2B1β基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与GenBank中的人源SH2B1β序列相符,SDS-PAGE电泳结果表明获得相对分子质量约75000的目的蛋白。结论成功获取了人源脂肪细胞的SH2B1β基因,并在BL21(DE3)中高效表达目的蛋白,为下一步表达纯化SH2B1β重组蛋白及蛋白的初步功能研究奠定基础。
- 邱国真陈白虹曲戎梅付琛颖董文其魏威王文敬王萍
- 关键词：克隆原核表达
