陈少沛
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并通过SDS-PAGE和western blot来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA螯合亲和层析的方法纯化重组蛋白,并测定该酶的米氏常数,用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性。最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功,表达产物在SDS-PAGE和western blot图的25 kD左右,与prx1真实的蛋白分子量相符,说明Prx1蛋白成功表达。Prx1纯化后产量达到7.59 mg/g菌体,纯度达到88.50%。纯化后的Prx1在37℃和pH 7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km为2.06×10-4 mol/L,质粒保护实验表明Prx1可以保护pUC18质粒免受氧化损伤。因此,Prx1在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。
- 毛爽陈少沛颜晟王海鹰宁正祥李杉王菊芳
- 关键词：蛋白印迹法
- 丁酸发酵液萃取-酯化偶联合成丁酸乙酯的研究被引量：1
- 2014年
- 丁酸乙酯是一种广泛应用于食品、香精、化学、医药和能源等工业的短链酯类。为实现利用丁酸发酵液合成丁酸乙酯,通过络合萃取丁酸发酵液并在萃取相中直接进行脂肪酶催化丁酸和乙醇发生酯化反应,实现了丁酸发酵液萃取-酯化偶联合成丁酸乙酯。首先,确定了三辛胺(TOA)-环己烷为合适的萃取剂和酯化反应的反应溶剂。其次,对反应条件进行优化,在最优反应条件下,萃取相中Novozym 435催化合成丁酸乙酯反应5 h基本达到平衡,酯化率为81.42%,体积产率为65.96 mmol/(L·h);酶在该体系中重复利用6次,酯化率仍未见明显降低,维持在85.40%-87.83%之间。100 m L丁酸发酵液通过萃取-酯化后,丁酸乙酯相对于丁酸的得率为0.65 mol/mol。利用丁酸发酵液萃取-酯化偶联合成丁酸乙酯的工艺具有工业应用价值。
- 张舍熹陈少沛杨晶王菊芳
- 关键词：丁酸乙酯萃取酯化
