梁慧敏
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 发文基金：中国博士后科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
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- SIRT7基因乙酰化活性缺失突变真核表达载体的构建
- 2015年
- 目的构建SIRT7基因乙酰化活性缺失的定点突变真核表达载体。方法用RT-PCR法从293T细胞中扩增SIRT7基因,并克隆到真核载体pcDNA 3.1/myc-His（-）A上。采用Two-step PCR定点突变技术,构建SIRT7基因的H187Y突变质粒,经测序确证定点突变成功,再将SIRT7及突变载体转染293T细胞,Western blot检测融合蛋白表达。结果克隆出SIRT7基因,构建了真核载体pcDNA 3.1/myc-His-SIRT7,经Two-step PCR获得突变体pcDNA 3.1/myc-His-SIRT7H187Y。DNA测序结果表明,编码187位氨基酸的560-562位碱基由CAC突变为TAC,其他碱基均无突变。SIRT7和H187Y突变载体转染293T细胞后,可检测出myc-SIRT7融合蛋白表达。结论成功构建了SIRT7以及H187Y突变的真核表达载体。
- 李小娜梁慧敏王天晓韩飞刘文斌郑立娟董严刘晋祎时小燕
- 关键词：TWO-STEPPCR定点突变真核表达载体
