李小娜
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CytoTrap酵母双杂交系统筛选p85α蛋白相互作用蛋白
- 2015年
- 目的筛选与p85α蛋白发生相互作用的新蛋白质分子。方法 PCR扩增小鼠p85α基因全长,并将此基因重组入pSOS载体,构建诱饵质粒pSOS-p85α,经酶切及测序鉴定构建正确后将其转化酵母菌cdc25Hα,检测其在酵母中的表达及有无自激活作用,并利用CytoTrap酵母双杂交系统筛选与诱饵蛋白p85α相互作用的蛋白质分子。结果成功获得重组诱饵质粒pSOS-p85α,并验证其可在酵母细胞中表达诱饵蛋白pSOS-p85α,且诱饵质粒在此双杂交系统中无自激活。利用此系统筛选出4个能与p85α相互作用的细胞蛋白,分别为v-Ki-ras2克尔斯滕大鼠肉瘤病毒癌基因同族体蛋白KRAS、小鼠着丝粒蛋白K、小鼠多聚嘧啶结合蛋白PTBP1、小鼠雄性激素调节蛋白RP2。结论成功筛选出小鼠p85α蛋白的相互作用蛋白,为进一步研究小鼠p85α蛋白及其相关信号通路的生物学功能提供了新线索。
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- 关键词：蛋白质相互作用
- SIRT7基因乙酰化活性缺失突变真核表达载体的构建
- 2015年
- 目的构建SIRT7基因乙酰化活性缺失的定点突变真核表达载体。方法用RT-PCR法从293T细胞中扩增SIRT7基因,并克隆到真核载体pcDNA 3.1/myc-His（-）A上。采用Two-step PCR定点突变技术,构建SIRT7基因的H187Y突变质粒,经测序确证定点突变成功,再将SIRT7及突变载体转染293T细胞,Western blot检测融合蛋白表达。结果克隆出SIRT7基因,构建了真核载体pcDNA 3.1/myc-His-SIRT7,经Two-step PCR获得突变体pcDNA 3.1/myc-His-SIRT7H187Y。DNA测序结果表明,编码187位氨基酸的560-562位碱基由CAC突变为TAC,其他碱基均无突变。SIRT7和H187Y突变载体转染293T细胞后,可检测出myc-SIRT7融合蛋白表达。结论成功构建了SIRT7以及H187Y突变的真核表达载体。
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- 关键词：TWO-STEPPCR定点突变真核表达载体
- Sox30基因在大鼠睾丸发育中的表达与甲基化分析被引量：1
- 2016年
- 目的分析Sox30基因在大鼠胚胎发育以及性腺中的表达和甲基化情况。方法取大鼠胚胎发育不同时期组织、出生后至73 d雌雄大鼠性腺和成年不同组织,利用RT-PCR分析该基因的表达情况。利用亚硫酸氢钠处理后测序法(BSP)分析Sox30基因甲基化发生情况。结果 Sox30基因在大鼠胚胎发育10.5 d就开始表达;出生后Sos30主要在睾丸中表达,且表达逐渐增加,而在卵巢、子宫中不表达;成年大鼠的脑、心、肝、肾、脾、胰、肺、垂体、肠、肌肉、海马等组织中该基因低表达或者不表达。Sox30表达受甲基化调控,低表达或者不表达组织中该基因明显高甲基化。结论 Sox30基因表达受到其启动子区域甲基化调控,成年大鼠中该基因仅在睾丸中高表达,表明该基因与雄性性别发育以及睾丸的功能维持有关。
- 马学翔董严韩飞李小娜时小燕陈洪强郝翔麟刘晋祎
- 关键词：DNA甲基化睾丸
- 砷诱导细胞自噬的分子机制研究进展
- 2015年
- 砷是一种类金属元素,对人体具有双重作用。人群长期慢性砷暴露可导致一系列疾病。此外,砷化合物不仅对急性早幼粒细胞白血病具有明显疗效,其抗癌效应也在许多实体肿瘤治疗中体现。近期研究表明,砷暴露和砷治疗肿瘤过程中均有自噬发生。因此,回顾砷诱导细胞自噬分子机制的研究进展,为砷暴露致癌及其疾病治疗的研究提供线索。
- 李小娜时小燕
- 关键词：砷自噬肿瘤
