目的:探究胶原纤维在酒精性肝损伤发展过程中各个阶段的变化规律及其与酒精性肝损伤的关系.方法:饲养清洁健康BALB/c♂小鼠40只,随机分为对照组(n=3)与模型组(n=37).将对照组3只小鼠处死,取肝;模型组小鼠每日给予0.15 m L/10 kg 56°红星二锅头白酒灌胃,持续4 wk,于开始灌胃后1、2、3、4 w k各取3只小鼠进行肝脏取材.天狼星红染色法观察小鼠肝组织胶原纤维病理变化情况,蛋白印迹法检测小鼠肝脏增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,P C N A)蛋白表达及变化趋势.运用ImageProPlus6.0对病理切片样本进行积分光密度(IOD)定量分析,Gel Pro4.0软件对目标蛋白条带灰度值进行测定.运用SPSS16.0对数据进行处理,用ANOVE法和非参数秩和检验法进行显著性分析.结果:第1、2周组小鼠肝组织胶原纤维含量持续显著增高(852.21±10.65 vs 345.24±65.94,1054.15±10.80 vs 852.21±10.65,P<0.01),第2周达到最高,随后第3、4周小鼠肝组织胶原纤维含量依次降低(588.75±17.18 vs 1054.15±10.80,559.40±14.17,P<0.01);小鼠肝组织中PCNA蛋白含量前2 wk明显下降,第2周时达到最小值,第3周较第2周增加显著,差异有统计学意义(P<0.05).第4周与第3周变化无明显差异.结论:在酒精诱导小鼠肝脏损伤的过程中,肝脏胶原纤维的变化规律是先增加后减少,变化明显;PCNA的表达出现显著动态变化,二者均可能与肝脏的损伤修复机制密切相关.
目的研究肝糖原在小鼠酒精性肝损伤过程中的动态变化及意义。方法 60只雄性小鼠随机分为2组:正常组(n=10),模型组(n=50)。正常组小鼠直接处死取肝;模型组小鼠每天给予56度红星二锅头(15 m L·kg^(-1)),连续灌胃5周,建立酒精性肝损伤模型。于建模第1,2,3,4,5周,各处死10只,取肝组织。用糖原过碘酸雪夫氏(PAS)染色,检测各组肝组织切片中肝糖原的表达情况即平均光密度值(MOD)。结果与正常组的MOD值(0.22±0.04)相比,模型组第1周(0.19±0.06 vs 0.22±0.04,P<0.01),第2周(0.17±0.05 vs0.22±0.04,P<0.01),第3周(0.14±0.02 vs 0.22±0.04,P<0.01),可见肝糖原含量依次下降,至第3周(0.14±0.02)肝糖原含量最低;而模型组第4周(0.17±0.07 vs 0.14±0.02,P<0.01),第5周(0.19±0.03 vs 0.17±0.07,P<0.05)肝糖原含量呈上升趋势。结论小鼠酒精性肝损伤过程中,肝糖原的变化规律为先减少后增加。
目的探究小鼠酒精性肝损伤中的病理表现.方法健康昆明小鼠♂30只,随机分为对照组(n=10),模型组(n=20),对照组于0 wk处死,取肝脏;模型组进行适应性喂养1 wk后,给予56度白酒灌胃(0.15 m L/20 g·d),连续8 w k,于4 wk和8 wk,颈椎脱臼处死小鼠,取其肝脏待用,制备石蜡切片和冰冻切片,采用HE染色和油红O染色,观察酒精性肝损伤中的脂滴表达变化,采用Image-Pro Plus6.0对病理切片样本进行累计光密度(integral optical density,IOD)定量分析.结果与对照组比较,第4周脂滴含量开始增加(20.29±7.07 vs 8.06±2.06,P<0.01),第8周末脂滴含量明显增多(34.88±15.33 vs 8.06±2.06,P<0.01),8 wk与4 wk相比,脂滴的表达量呈上升趋势(34.88±15.33 vs 20.29±7.07,P<0.05).结论 8 wk末成功建立了酒精性脂肪肝模型,可以用来评估酒精性脂肪肝治疗药物的预后作用;在小鼠酒精性肝损伤中,随着脂肪变性的发生,脂滴含量不断增加.
目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在小鼠酒精性肝损伤过程中的表达与意义。方法将50只健康雄性小鼠按照体重随机分为2组:对照组(n=10),模型组(n=40)。用56°红星二锅头经酒精灌胃(15 m L·kg-1)诱导小鼠肝损伤1,2,3,4周,建立小鼠酒精性肝损伤模型,分别于0(对照组小鼠)与1,2,3,4周,各取10只小鼠于眼球取血,用赖式法检测血清谷草转氨酶(AST)的活性;以颈椎脱臼法处死小鼠,取小鼠肝,用蛋白印迹法测定肝组织TNF-α的表达量。结果小鼠肝AST酶的活性在0,1,2,3,4周分别为(112±22),(126±24),(967±30),(1010±35),(206±23)U·L^(-1),与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组的小鼠肝AST酶的活性在第1周缓慢上升,第2周迅速上升,于第3周达到高峰,第4周开始下降,但仍高于对照组。TNF-α相对积分光密度在0,1,2,3,4周分别为1.15±0.12,1.10±0.08,2.13±0.16,2.16±0.15,1.16±0.11,与对照组相比,第1周略有下降,第2周迅速上升,第3周达到高峰,第4周出现下降,仍高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论在酒精灌胃诱导的小鼠肝损伤的进程早期,TNF-α促使肝细胞的损伤和坏死,并参与了后期肝的修复再生。
