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刘存: 作品数：15 被引量：63H指数：5; 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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A型猪塞内卡病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立被引量：10: 2019年; 本研究针对A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)基因组保守区域设计了特异性引物及探针,建立了快速检测SVA的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的Taq Man荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9974;特异性良好,与口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒不存在交叉反应;对SVA核酸最低检测下限为3.75 copies/μL,而普通PCR最低检测下限为3.75×103 copies/μL;批内和批间的变异系数为均小于5%,重复性良好。本研究建立的SVA TaqMan荧光定量PCR方法为检测猪水疱性疾病病原提供了一种快速、灵敏的检测方法,为开展SVA流行病学调查提供了技术支持。; 李秀博刘存鄢明华崔玉东崔玉东

ICTV第十次病毒分类报告中对瘟病毒属的修定被引量：4: 2019年; 国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)在第十次病毒分类报告中对黄病毒科瘟病毒属的命名方法及病毒种进行了修定。为及时了解瘟病毒属命名方法及病毒种的新变化,本文通过对ICTV第十次病毒分类报告及相关文献的总结,对瘟病毒属病毒种的分类依据及命名方法进行了概括和介绍,有助于从事兽医工作的科研工作者及时了解病毒分类中瘟病毒属的新变化。; 刘存梁琳梁琳; 关键词：病毒分类

微生态制剂规模化猪场的应用: 随着抗生素在畜禽生产当中的广泛应用乃至滥用,其所产生的负面效应逐渐明显,研发和推广绿色环保的抗生素替代品对消除抗生素负面效应及推动我过养猪业的绿色可持续发展具有重要意义。本文综述了微生态制剂在规模化猪场的应用。; 刘存刘琪刘畅罗亚坤王静崔尚金; 关键词：微生态制剂规模化猪场抗生素; 文献传递

CDV、CPV、CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用被引量：5: 2017年; 为建立一种快速检测犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒Ⅱ型(CAV-2)和犬副流感病毒(CPIV)的多重PCR方法,参照Gen Bank中的相关病毒基因序列,分别设计了4对引物,用于特异性扩增CDV H基因、CPV VP2基因、CAV-2 E3基因和CPIV NP基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立了同时扩增CDV(410 bp)、CPV(253 bp)、CVA-2(655 bp)和CPIV(868 bp)的多重PCR方法。利用建立的多重PCR方法,对CDV、CPV、CAV-2、CPIV、CDV+CPV+CAV-2+CPIV和犬冠状病毒(CCV)的DNA或c DNA模板进行扩增,发现该方法的特异性良好。利用建立的多重PCR方法与单一PCR方法进行敏感性比较,发现两者敏感性相差10倍,证明多重PCR方法敏感性良好。利用该方法对从北京市采集的30份犬病料样品进行检测,发现CDV阳性率为63.33%(19/30)、CPV阳性率为33.33%(10/30)、CAV-2阳性率为6.66%(2/30)、CPIV阳性率为0(0/30)。检测结果证明建立的多重PCR方法可用于临床诊断。; 刘畅刘畅刘存王静刘存梁琳王静钱爱东刘琪; 关键词：多重PCR 犬瘟热病毒犬细小病毒犬副流感病毒

A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断研究进展被引量：1: 2020年; 为了进一步了解A型猪塞内卡病毒的特征,通过查阅并总结A型猪塞内卡病毒文献,对A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型猪塞内卡病毒的认识和防控意识。; 刘存刘畅刘畅王静刘琪崔尚金王静; 关键词：小RNA病毒

A型塞内卡病毒病原学、流行病学和诊断研究进展被引量：8: 2018年; 为了进一步了解A型塞内卡病毒的特征,通过查阅与A型塞内卡病毒相关的文献,对A型塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型塞内卡病毒的认识及防控意识。; 刘存刘畅刘畅王静刘琪崔尚金王静; 关键词：小RNA病毒

一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用: 本发明涉及一种鸽球虫病活疫苗及其制备方法和应用。所述鸽球虫病活疫苗包括拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫。本发明通过复合拉氏艾美耳球虫和原鸽艾美耳球虫得到一种用于免疫鸽球虫病的疫苗，本发明所述疫苗易于生产、安全性高、效力优、...; 汤新明梁琳梁瑞英刘存崔尚金; 文献传递

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3C的原核表达及生物信息学分析被引量：1: 2017年; 为获得猪脑心肌炎病毒(EMCV)3C蛋白并进一步了解其结构,本研究以EMCV HB10株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增3C基因,将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、双酶切和测序鉴定,挑选测序正确的质粒经双酶切获得目的片段并将其克隆至pET32a载体以构建重组原核表达质粒。将重组质粒转化至大肠杆菌TranSetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况,Western blotting检测纯化后3C蛋白及其对EMCV的反应原性。结果显示,成功克隆3C基因,长度为615bp,编码205个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,3C蛋白主要以包涵体形式表达,His-3C蛋白大小约为40ku。Western blotting分析可知,纯化后His-3C蛋白条带单一,同时3C蛋白与EMCV细胞毒有良好的反应原性。经生物分析软件预测可知,EMCV 3C蛋白为非分泌蛋白,无跨膜区,有多个磷酸化位点,参与蛋白的水解过程。3C蛋白酶作为EMCV基因组编码蛋白中唯一的蛋白酶,在病毒复制的过程中具有不可或缺的作用。本研究成功构建了EMCV 3C蛋白原核表达载体并对其结构进行了预测,为进一步研究3C蛋白的作用及催化机理奠定基础。; 罗亚坤梁琳朱禹王静刘琪刘存崔尚金; 关键词：脑心肌炎病毒原核表达生物信息学分析

猪A型塞内卡病毒分离鉴定及其VP1基因变异分析被引量：1: 2019年; 2017年7月,南方某猪场发生不明病原引起的猪水疱性疾病。为了确诊本次水疱性疾病的病因及了解病原的遗传演化关系,笔者通过RT-PCR方法对引起该场水疱性疾病的病原进行检测,利用BHK21细胞分离病毒,RT-PCR、电镜观察等方法对分离病毒进行鉴定,同时对其主要的抗原基因VP1进行比对分析。RT-PCR检测结果表明导致该猪场发生水疱性疾病的病原为A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA),将利用BHK21细胞分离并经鉴定的病毒命名为CH/FuJ1/2017株。同源性分析结果显示,CH/FuJ1/2017株与报道的SVV-001株的相似性最低,与分离自美国的USA-GBI29-2015株的相似性最高。基于SVA VP1基因氨基酸序列的分析结果表明,SVA分离株形成一个独立的小分支,与SVV-001株相比,SVA分离株在VP1蛋白的59、62、63、93、97、172位氨基酸存在突变,且位于VP1蛋白的B-C环上和CD-Ⅱ环上,这可能与SVA的细胞嗜性改变有关。综上表明我国SVA分离株具有遗传多样性,部分国内分离株与国外SVA分离株间具有密切的相关性。; 李秀博刘存崔玉东崔玉东梁琳崔尚金; 关键词：VP1

猪A型塞内卡病毒SVA/CH-Fuj株及其应用: 本发明提供猪A型塞内卡病毒SVA/CH‑Fuj株及其应用。毒株CH‑Fuj具有免疫原性好、培养特性好、效价稳定等优点，将SVA/CH‑Fuj株接种ST细胞，收获培养物，用二乙烯亚胺灭活后，与ISA 201 VG佐剂混合乳...; 崔尚金梁琳刘存

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