董旭
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 基于^(19)F化学标记磷酸化泛素的温度传感器开发
- 2021年
- 泛素是一种真核细胞信号分子,主要参与蛋白质降解和DNA修复等生命活动.泛素Ser65位被磷酸化之后,在溶液中呈现两个稳定的溶液构象,这两种构象的比例能够被pH调控,本研究利用NMR进一步发现它还受到温度影响.基于该发现,对磷酸化泛素进行了^(19)F化学标记,利用^(19)F NMR方法表征了不同温度下磷酸化泛素两种构象的比例,发现两者比例变化与温度之间的关系可以通过线性方程来描述,利用该方程可以通过构象比例计算样品内部温度,因此可以作为一种基于NMR检测的温度传感器.本文所开发的基于^(19)F化学标记磷酸化泛素的温度传感器不仅能够作为体外样品温度检测的有力工具,还有望用于检测细胞内部的温度.从而有助于揭示生物学特性和功能.
- 张志武杨菊聂泽锋叶尚祥董旭唐淳
- 关键词：泛素磷酸化核磁共振温度传感器
- 利用内源荧光筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂
- 2014年
- 目的：建立内源荧光检测筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）抑制剂的方法.方法：以1,4-二马来酰亚胺基丁烷（BMB）交联G355 C/D393C双突变NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交联型NAMPT蛋白的自发荧光变化（280 nm激发波长,333 nm发射波长）检测化合物与蛋白的结合,以核磁共振方法体外检测化合物对NAMPT催化作用的影响,以MTT方法检测化合物对人肺癌A549细胞活性的影响.结果：FK866在0.1～1.0 μmol/L浓度范围内能浓度依赖地抑制野生型NAMPT自发荧光,但对交联型NAMPT的自发荧光没有影响.迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对两种蛋白自发荧光的抑制率无显著差异.FK866能够显著抑制NAMPT的催化作用,但迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对NAMPT的催化作用无抑制作用.FK866显著抑制A549细胞的活性,而迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对A549细胞活性无抑制作用.结论：基于野生型和交联型NAMPT蛋白的内源性荧光检测法可以筛选与NAMPT蛋白结合的化合物,并分析化合物是否结合在NAMPT的催化活性部位,迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸可结合在NAMPT催化活性位点以外的部位.
- 韩雪董旭蒋文学黄鹏张纬萍唐淳
- 关键词：NAD酶抑制剂
