王磊
- 作品数：35 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一种产气荚膜梭菌ε毒素重组亚单位疫苗及其生产方法
- 本发明涉及一种产气荚膜梭菌ε毒素重组亚单位疫苗及其生产方法。本发明制备的产气荚膜梭菌ε毒素重组亚单位疫苗，系采用经过密码子优化、含有3个氨基酸突变的重组产气荚膜梭菌ε毒素蛋白生产，即最大限度地保留天然毒素蛋白的完整性和空...
- 陈小云杜吉革朱真薛麒王磊印春生李启红康凯姚文生
- 文献传递
- 重组产气荚膜梭菌ε毒素三点突变体的融合表达及其免疫活性分析被引量：7
- 2018年
- 为获得并评价重组产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)三点突变体蛋白的毒力及免疫活性,对已知的D型产气荚膜梭菌ETX编码基因进行优化设计,同时引入包括第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,及第106位组氨酸突变为脯氨酸共3个氨基酸突变,并在该基因5'端添加Th细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端编码序列,经人工合成获得基因片段GTFNETXm3。随后,将该基因片段克隆至原核表达载体p ET30a-(+),转染BL21(DE3)菌诱导表达、纯化,从而获得重组蛋白,进而利用Western blot方法检测重组蛋白与D型产气荚膜梭菌抗血清的反应性,并检测其对犬肾细胞系(MDCK细胞)及小鼠的毒力。最后,将重组蛋白与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。结果显示,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,且能与D型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;100μg/m L的重组蛋白未显示细胞毒性;6.25 mg/kg剂量的重组蛋白对小鼠无致死性;每毫升的一免抗血清可中和80~120个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和750~1100个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔4/4保护。试验表明,产气荚膜梭菌ETX三点突变体的毒力基本消失,且保留了良好的免疫原性,是D型产气荚膜梭菌病基因工程亚单位疫苗的理想候选抗原蛋白。
- 杜吉革张秀坤朱真薛麒李启红印春生彭小兵王磊姚文生康凯陈小云
- 关键词：突变体鞭毛蛋白抗原性
- 分泌中和腐败梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株及应用
- 本发明公开了分泌中和腐败梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株及应用。属于生物技术领域。本发明筛选到一株分泌中和腐败梭菌α毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CGMCCNo.19400，并利用该杂交瘤细胞株制备单克隆抗体3...
- 刘莹杜吉革陈小云李双星张秀坤王磊杨承槐
- 文献传递
- 一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗及其生产方法
- 本发明涉及一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗及其生产方法。本发明将野生型腐败梭菌α毒素成熟毒素的第54位半胱氨酸突变为亮氨酸，第264位天冬酰胺突变为丙氨酸，第269位组氨酸突变为丙氨酸，第310位色氨酸突变为丙氨酸，获得...
- 陈小云杜吉革薛麒朱真王磊印春生李启红康凯姚文生
- 一种无毒性破伤风毒素和诺维梭菌α毒素重组融合蛋白
- 本发明涉及一种无毒性破伤风毒素和诺维梭菌α毒素重组融合蛋白。本发明制备的重组融合蛋白，系采用经过密码子优化、破伤风毒素C片段与诺维梭菌α毒素的C末端以及N端的无毒性抗原表位的重组融合蛋白生产，即最大限度地保留两种毒素蛋白...
- 杜吉革刘莹张莹辉陈小云李旭妮李启红薛麒朱真王磊印春生姚文生
- 文献传递
- siat7e基因和st3gal Ⅰ基因双表达载体的构建及其初步应用被引量：3
- 2013年
- 应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从人类基因组中扩增出全长为1011 bp的唾液酸转移酶(siat7e基因),并从鸡基因组中扩增出全长为1029 bp的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GAL Ⅰ)基因。将它们分别克隆入pMD18-T载体中。对扩增的全长siat7e基因序列采用BamH Ⅰ和PstⅠ双酶切后连接入pReceiver真核表达载体,构建pRE-SⅠAT重组表达载体,进而,对扩增的全长st3gal Ⅰ基因采用Sac Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,后连接入pRE-SIAT重组表达载体,构建pRE-SIAT-ST3重组真核表达载体。经限制性内切酶消化及DNA序列分析,证实构建的重组表达质粒是正确的。将构建的双基因表达载体转染MDCK细胞,利用荧光显微镜观察,可见细胞表达明显的绿色荧光,从而初步证实了外源基因在MDCK细胞中的正确表达。本研究为最终构建能够适应悬浮培养,并且对禽流感病毒更为易感的MDCK细胞系奠定了基础。
- 陈小云张敏张启龙王磊王栋蒋桃珍
- 关键词：MDCK细胞
- 端粒酶在细胞永生化中的应用被引量：4
- 2013年
- 细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点和难点之一。位于真核生物细胞染色体末端的端粒可以稳定染色体,而由RNA和蛋白质组成的端粒酶以自身RNA为模板合成端粒。因此,将外源性端粒酶逆转录酶(TERT)基因转染至目的细胞,则可能诱导细胞发生永生化。本文从端粒、端粒酶、端粒酶在细胞永生化中的应用、端粒酶在传代细胞系中的应用、存在问题与展望等五个方面进行了综述,以期为相关研究人员提供参考。
- 陈小云张敏王磊张启龙王栋蒋桃珍
- 关键词：端粒酶细胞永生化
- 牛支原体NM001株单克隆抗体的制备与鉴定
- 2024年
- 为获得抗牛支原体NM001株单克隆抗体,并评价其特性,以牛支原体分离株NM001作为抗原免疫6周龄BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA方法筛选到2株能稳定分泌抗牛支原体的单克隆抗体细胞,命名为2C5和7G3。其细胞上清的间接ELISA抗体效价分别为6.4×10^(3)和1.2×10^(4)。经亚型测定,单抗2C5和7G3均属于IgG1类,轻链均是λ型。制备腹水并对单抗进行纯化和特性鉴定,两株单抗的间接ELISA抗体效价分别为1.02×10^(5)和4.09×10^(5),且两株单抗与无乳支原体、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、牛巴氏杆菌均无交叉反应。Western Blot结果显示,2株单抗均能特异性识别牛支原体全菌蛋白中的相应蛋白。试验表明,单抗2C5和7G3能够与牛支原体发生特异性反应,从而为牛支原体血清学检测提供一定的物质基础。
- 刘莹王静文张敏陈小云王磊杨承槐
- 关键词：牛支原体单克隆抗体特异性
- 一株牛支原体的分离鉴定及致病性初步研究被引量：5
- 2021年
- 对采集到的疑似牛支原体肺炎肺组织病料进行病原的分离,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定,结果显示成功分离获得1株牛支原体,命名为NM001。该分离株的菌落形态呈典型的“荷包蛋状”,不能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素。PCR能够扩增出牛支原体特异的P48基因条带,16S rRNA基因序列与Ningxia-1序列同源性为99.03%。将该分离株接种2头6月龄犊牛均出现明显的临床症状,剖检后胸腔中少量淡黄色渗出液,肺脏出现肉样实变。试验结果表明,分离到的牛支原体NM001株对牛具有较强的致病性,为牛支原体攻毒模型的建立奠定了基础。
- 刘莹杨承槐陈小云王磊
- 关键词：牛支原体
- 一种无毒性破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白
- 本发明涉及一种无毒性破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白。本发明系采用经过密码子优化、破伤风梭菌毒素C片段与含有多个氨基酸突变的产气荚膜梭菌β毒素突变体的重组融合蛋白，即最大限度地保留两种毒素蛋白的免疫原性，又避免...
- 杜吉革刘莹王磊陈小云李旭妮李启红朱真薛麒张莹辉姚文生印春生
- 文献传递
