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抗重金属Cr^(3+)单克隆抗体的研制及其免疫学特性分析被引量：3: 2016年; 旨在研制敏感、特异、稳定的抗Cr^(3+)单克隆抗体(Cr^(3+)mAb)。用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)鳌合Cr^(3+)形成Cr^(3+)-ITCBE半抗原,异硫氰酯法制备人工免疫原Cr^(3+)-ITCBE-BSA和检测抗原Cr^(3+)-ITCBE-OVA,紫外扫描法(UV)、凝胶电泳法(SDS-PAGE)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICPAES)进行免疫原鉴定;用Cr^(3+)-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立Cr^(3+)mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)mAb,并对其免疫学特性进行分析。结果表明,免疫原制备成功,Cr^(3+)-ITCBE-BSA中Cr^(3+)和BSA的质量浓度分别为140.8mg/L和5.81g/L,筛选出2A3C11、2A3D9、2A11G5 3株杂交瘤细胞,其中最好的2A11G5间接ELISA效价细胞培养上清为1∶(2.56×103)、腹水为1∶(5.12×105),同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为2.69×109 L/mol,对Cr^(3+)的半数抑制质量浓度(IC50)为16.6μg/L,与其他重金属离子无交叉反应。表明成功研制亲和力高、特异性强、稳定性好的Cr^(3+)mAb,为铬离子残留免疫学检测方法的建立奠定基础。; 王亚楠丁菡王晓斐雷壮牛琳琳王自良; 关键词：CR^3+人工免疫原单克隆抗体免疫学特性

食品总铬质量浓度icELISA试剂盒的研制及初步应用被引量：1: 2017年; 为研制食品中总铬质量浓度检测间接竞争ELISA(icELISA)试剂盒(Cr-Kit)。利用蛋白质连接技术合成免疫原Cr^(3+)-iEDTA-BSA,紫外扫描(UV)和电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)进行鉴定;用Cr^(3+)-iEDTA-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗Cr^(3+)-EDTA mAb细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)-EDTA mAb,并对其特性进行分析;应用Cr^(3+)-EDTA mAb研制Cr-Kit,测定其性能并进行初步应用。结果表明,免疫原制备成功,Cr^(3+)-iEDTA-BSA中Cr^(3+)和BSA的质量浓度分别为140.8mg/L和5.81g/L;筛选出2A3C11、2A3D9、2A11G5共3株杂交瘤细胞株,其中2A11G5最好,经6次传代分泌抗体稳定,亲和常数(Ka)为2.69×109 L/mol,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Kit标准曲线的线性范围为1.0~264μg/L,检测限为1.0μg/L,IC50为8.37μg/L,河水样、大米样、面粉样和猪肉样的平均加标回收率分别为101.7%、96.47%、95.8%和84.3%,Cr-Kit与国标(GB5009.123-2014)石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)的符合率为100%。本研究成功研制了Cr-Kit,可满足食品总铬残留的检测要求。; 王亚楠王晓斐王晓斐张海棠张海棠; 关键词：CR3+单克隆抗体

铬离子单克隆抗体的制备及食品总铬含量检测胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：4: 2016年; 目的:制备三价铬离子螯合物单克隆抗体(Cr^(3+)-EDTA m Ab),研制胶体金免疫层析试纸条(Cr-Strip)。方法:用异硫氰酯法合成Cr^(3+)-i EDTA-BSA,UV和ICP-AES进行鉴定;细胞融合技术筛选Cr^(3+)-EDTA m Ab细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)-EDTA m Ab,并对其特性进行分析;应用Cr^(3+)-EDTA m Ab研制Cr-Strip,并测定其性能。结果:筛选出3株杂交瘤,最好的是2A11G5,Ka为2.69×109L/mol,对Cr^(3+)-EDTA的IC50为9.84μg/L,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Strip的检测时间为10 min,检测限为5μg/L,其检测结果与ICP-AES符合率为100%。结论:制备出了高质量的Cr^(3+)-EDTA m Ab,研制出更为灵敏的Cr-Strip。; 王亚楠王晓斐丁菡张海棠范国英王自良; 关键词：单克隆抗体胶体金免疫层析

食品黄曲霉毒素总量检测方法的研究与应用被引量：11: 2018年; 食品中黄曲霉毒素总量(total aflatoxins,TAFs)污染残留的广泛性、严重性和危害性倍受食品行业的关注,单一黄曲霉毒素检测已不能满足行业的技术需求,该文就食品TAFs目前所使用的检测方法如生物分析法、理化分析法和免疫分析法的研究进展、应用情况、技术优势及缺陷等简要综述,旨在为食品TAFs检测方法的选择使用和发展完善提供借鉴和思路。; 王亚楠王晓斐王自良; 关键词：食品

食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用被引量：8: 2016年; 目的:建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法:用1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鳌合镉离子合成Cd^(2+)-iEDTA半抗原,异硫氰酯法制备免疫原Cd^(2+)-iEDTA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和包被原Cd^(2+)-iEDTA-鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA),电感耦合等离子体发射光谱法和聚丙烯酰胺凝胶法进行鉴定;用Cd^(2+)-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选Cd^(2+)-EDTA单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd^(2+)-EDTA mAb;应用Cd^(2+)-EDTA mAb建立Cd^(2+)残留胶体金免疫层析快速检测方法 (Cd^(2+)-Strip),并测定其性能。结果:免疫原偶联成功,Cd^(2+)-iEDTA-BSA中BSA与Cd^(2+)的含量分别为7.1 mg/mL和191.7μg/mL;筛选出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株杂交瘤细胞,经9次传代分泌抗体稳定,亲和力最高的2E10G9株亲和常数(Ka)为7.58×10~8 L/mol,对Cd^(2+)-iEDTA的半数抑制浓度为16.3μg/L,与Hg^(2+)-EDTA的交叉反应(cross-reaction,CR)率为18.6%,与其他重金属离子无CR;Cd^(2+)-Strip的检测时间为10 min,检出限为5μg/L,其检测结果与竞争ELISA试剂盒(Cd^(2+)ELISA-Kit)、电感耦合等离子体发射光谱法符合率为100%。结论:制备出了亲和力高、特异性强的Cd^(2+)mAb,建立了灵敏、特异、快速、简便的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。; 王亚楠王晓斐牛琳琳雷壮张海棠王自良; 关键词：镉离子单克隆抗体胶体金免疫层析

G族黄曲霉毒素半抗原分子设计、抗原合成及抗体特性被引量：5: 2018年; 根据黄曲霉毒素G_1(Aflatoxin G_1,AFG_1)的分子结构和活性位点,采用半缩醛法(SA)、环氧化物法(EP)和烯醇醚衍生物法(EED)制备G族AF人工抗原AFG_1-BSA,通过UV和SDS-PAGE进行鉴定。用AFG_1-BSA免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗体(AFG_1 pAb),间接ELISA检测AFG_1pAb效价,阻断ELISA分析其敏感性,交叉反应试验分析其特异性。结果显示,AFG_1-BSA合成成功,3种合成方法中,SA法效果最好,AFG_1与BSA的分子结合比为4.32∶1,间接ELISA效价为1∶(6.4×10~3),阻断ELISA检测其IC_(500为13.6μg·kg^(-1),与AFG_2的交叉反应率(CR)为82.19%,与AFB_1、B_2无CR。表明获得高效价、敏感、特异、广谱的AFG pAb,为G族AF和AF总量免疫检测方法的建立奠定基础。; 王亚楠王晓斐牛琳琳雷壮张海棠王自良; 关键词：半抗原人工抗原多克隆抗体特性分析

黄曲霉毒素B_1半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性研究进展被引量：3: 2016年; 本文综述了国内外半抗原分子设计方法、基本要求、应遵循原则、抗原合成方法等方面的研究进展,尤其是对黄曲霉毒素B_1(AFB_1)半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性进行了详尽阐述,旨在为AFB_1制备AFB_1及其他小分子半抗原高质量的抗体提供新的方法和思路。; 王亚楠王晓斐牛琳琳雷壮张海棠王自良; 关键词：黄曲霉毒素B1

食品中黄曲霉毒素总量免疫分析方法研究进展被引量：3: 2017年; 黄曲霉毒素(aflatoxins,AFs)污染食品的广泛性、严重性和危害性倍受食品行业的关注,单一黄曲霉毒素检测已不能满足行业的需求。针对食品黄曲霉毒素总量检测目前普遍采用理化分析方法,相比之下由于免疫分析技术具有高特异性、高灵敏性、简便性等技术优势,已成为今后的发展方向和重要的研究课题。本文就食品黄曲霉毒素总量免疫分析技术的研究进展作简要综述,旨在为食品AFs总量免疫分析提供新的方法和思路。; 王亚楠王晓斐牛琳琳雷壮张海棠王自良; 关键词：食品免疫分析

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王晓斐

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