赵凤仪
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金西安市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人TSHR A亚单位重组腺相关病毒体内外表达研究
- 2020年
- 目的探讨人TSHR A亚单位重组腺相关病毒(rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen)能否在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠体内表达及其表达效率。方法以rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染NIH3T3,Western blotting检测目的基因蛋白表达;分别以不同剂量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen注射雌性BALB/c小鼠,免疫荧光法检测TSHR A亚单位蛋白在各个器官的表达,免疫放射法测定血清TSHR抗体(TRAb)滴度。结果感染rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreenNIH3T3细胞48 h及72 h后均有目的蛋白表达,与24 h相比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜下可见腿部骨骼肌、心肌、肝脏、脾脏有不同程度的TSHR289表达;放免法测定结果显示,注射剂量越大,血清TRAb抗体滴度越高,但只有高剂量和对照组之间有统计学差异(P<0.05)。中剂量和高剂量肌内注射在第4、8、12周小鼠体内均有抗体反应,但以第4周最强,4~8周逐渐减弱,抗体持续时间可达12周。结论rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen可在体外及小鼠体内高效表达,并具有较强免疫原性,可能成为制备Graves病模型的一种重要手段。
- 赵凤仪王静雅谢宝松赵媛丁习赵洋高楚淇德吉措穆施秉银伍丽萍
- 关键词：重组腺相关病毒蛋白表达格雷夫斯病
- 白芍总苷对BALB/c小鼠Graves病模型的保护作用及其机制研究被引量：1
- 2023年
- 目的探讨白芍总苷对BALB/c小鼠Graves病(GD)模型的保护作用及其机制。方法将50只(6周龄,体重16~18 g)无特定病原体级雌性BALB/c小鼠按随机数字表法分为5组,分别设为对照组、模型组、早期低剂量白芍总苷干预组(250 mg·kg^(-1)·d^(-1))、早期高剂量白芍总苷干预组(500 mg·kg^(-1)·d^(-1))和晚期白芍总苷干预组,每组各10只。除对照组外,其余4组均注射表达促甲状腺激素受体(TSHR)A亚单位的重组腺病毒进行3次免疫(第0、3和6周),完成GD建模;早期低剂量和高剂量干预组全程予以含不同剂量白芍总苷的饲料,晚期干预组自第2次免疫后1周(第4周)起加用含低剂量白芍总苷的饲料。于第4周取小鼠尾静脉血检测促甲状腺素受体抗体(TRAb)、总甲状腺素(TT4)水平;第10周检测小鼠血清TRAb及TT4水平及各组调节性T细胞(Treg)比率,并观察甲状腺组织病理变化。检测各组血清辅助性T细胞1(Th1)及Th2细胞相关因子白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等水平,探讨白芍总苷对BALB/c小鼠GD模型的保护作用及其机制。结果第4周时,早期高剂量干预组TT4[(55.07±12.89)μg/L]水平低于模型组[(74.33±8.63)μg/L](P<0.05),早期低剂量干预组和晚期干预组TT4水平和模型组差异无统计学意义(均P>0.05);早期低剂量干预组、早期高剂量干预组和晚期干预组小鼠TRAb水平和模型组差异均无统计学意义(均P>0.05)。第10周时,早期高剂量干预组TRAb[(90.00±26.89)U/L]、TT4[(32.66±8.11)μg/L]水平均低于模型组[(396.97±95.35)U/L,(73.70±16.33)μg/L](均P<0.05),而早期低剂量干预组和晚期干预组小鼠TRAb、TT4水平与模型组差异均无统计学意义(均P>0.05)。早期高剂量干预组甲亢小鼠甲状腺组织呈局灶性增生性改变,而其他组甲亢小鼠甲状腺组织呈弥漫性增生性改变。第10周(3�
- 伍丽萍谢宝松王静雅德吉措穆赵凤仪丁习刘星君林晓瑛周星辰赵媛吴谦施秉银
- 关键词：格雷夫斯病白芍总苷细胞因子
- 耐性肽hCDR1诱发小鼠狼疮样病变的研究
- 2017年
- 目的探讨基于人dsDNA抗体分子互补决定区1(CDR1)的耐受肽(tolerizing peptide)hCDR1作为致病原诱发小鼠狼疮样病变的可能。方法 6-8周龄B6D2F1雌性小鼠40只,随机分为hCDR1 20μg组、100μg组、500μg组、阴性对照组和阳性对照组。完全弗氏佐剂乳化hCDR1,足跖及尾根部多点皮下注射免疫h CDR1组小鼠,间隔3周,不完全弗氏佐剂乳化hCDR1加强免疫1次;阴性对照组用不含hCDR1的佐剂皮下免疫,阳性对照组小鼠接受DBA/2小鼠脾脏及胸腺单细胞悬液尾静脉注射形成慢性移植物抗宿主样狼疮鼠(SLE-c GVHD)。尿蛋白试纸监测小鼠每周蛋白尿变化。首次免疫后9周采血,检测血液常规;ELISA法检测血清中h CDR1抗体、dsDNA抗体、组蛋白抗体及总IgG抗体;留取肾脏,直接免疫荧光检测肾脏免疫复合物沉积情况;HE染色观察肾脏病理改变。结果 hCDR1 100μg组和500μg组小鼠出现狼疮样改变。与阴性对照组相比,100μg组小鼠和500μg组小鼠血清dsDNA抗体、组蛋白抗体OD值增加(P<0.05);外周血血小板减少(P<0.05),白细胞增加(P<0.05);75%小鼠出现狼疮样肾脏改变,表现为尿蛋白阳性,肾小球增生以及肾小球基底膜IgG免疫复合物的沉积。20μg剂量组小鼠及阴性对照组小鼠未出现狼疮样改变。结论 hCDR1具有免疫原性,可以作为致病原诱发B6D2F1小鼠出现狼疮样病变。
- 孙玉石杨飞暴玲玉王悦赵凤仪焦翔杨静施秉银
- 关键词：移植物抗宿主病过继免疫小鼠
- 人TSHR A亚单位重组腺相关病毒2/9载体的构建及鉴定被引量：1
- 2019年
- 目的构建人促甲状腺素受体(TSHR)A亚单位重组腺相关病毒2/9杂合载体(rAAV2-9-hTSHR289-IRES-ZsGreen),为研究格雷夫斯病建立理想动物模型和探索基因预防提供更佳手段。方法以 Eco RⅠ和 Bam HⅠ将腺相关病毒骨架质粒 pAAV-IRES-ZsGreen和含hTSHR289的pDC315质粒双酶切,回收酶切病毒骨架质粒及目的片段进行连接,产物转化JM109感受态细菌,获取重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen。经酶切电泳、测序鉴定后,将pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen、辅助质粒pHelper、包装质粒pAAV-2/9(AAV2-Rep,AAV9-Cap)采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获取大量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen,经纯化后荧光显微镜下观察其包装效率,rQ-PCR法测定病毒滴度。将rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染HEK293细胞,ELISA法检测不同时间点hTSHR289蛋白表达水平。结果重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;荧光显微镜下观察显示转染293AAV细胞72 h,病毒包装效率达92%~94%,rQ-PCR法测定的rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen病毒滴度为1×10^13 vg/mL;ELISA法显示rAAV2/9介导的 hTSHR289 蛋白表达96 h明显高于72 h及48 h。结论成功构建rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen重组腺相关病毒载体并能有效转染和表达。
- 赵凤仪何明倩王悦张萌胡诗倩施秉银伍丽萍
- 关键词：重组腺相关病毒格雷夫斯病
