王青松
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 普通狨猴部分传染性疾病检疫指标的探讨被引量：1
- 2014年
- 目的 对从南非引进普通狨猴和实验室人工繁殖饲养的狨猴进行传染病的检验,通过比较分析,以获得普通狨猴的传染性疾病的检疫指标.方法 对动物分别进行了血浆甲型肝炎病毒检测、肝脏B超检测、结核杆菌皮肤检测、肠道寄生虫检查、粪常规及肠道致病菌检查、皮肤及口腔疱疹病毒检测等.结果 所有待检狨猴均未出现甲肝、结核杆菌、肠道寄生虫致病菌、疱疹病毒的阳性感染.结论 经该传染病检验方法的检测,所有动物均未感染传染性疾病,且方法安全有效,适合作为普通狨猴的传染病初筛方法.
- 李萌乾王青松张占恒刘晓龙王星童李婷婷尹海芳刘凤勇
- 关键词：传染病检疫
- MLH1R217C/BRAFV600E突变型家族性甲状腺乳头状癌永生化细胞系的建立及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径。方法选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原代细胞。使用改良的DMEM/F12培养基,添加促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、表皮细胞生长因子(EGF)及氢化可的松等进行培养。在原代细胞早期分2种方式导入外源基因SV40T/TERT用于诱导永生化。利用RT-PCR检测甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(TG)、促甲状腺激素受体(TSHR)、钠/碘共同转运体(NIS)等基因的表达,同时利用免疫荧光技术检测TPO及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)蛋白的表达。提取该患者外周血DNA,进行突变基因的检测。提取细胞基因组PCR扩增后测序,进行突变基因的检测。结果分离的FPTC原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长;细胞生长6个月,转染SV40T组(标记为FPTC-S)传代至p26,FPTC细胞传代至p23,转染SV40T+h TERT组(标记为FPTC-ST)传代至p19,细胞增殖能力较好;FPTC-S与FPTC-ST细胞均能够在基因水平稳定表达TPO、TG与TSHR;患者外周血中存在MLH1 R217C胚系突变;原代细胞存在BRAF V600E突变;原代细胞及永生化的细胞系中均存在MLH1 R217基因突变。结论本研究初步建立了FPTC永生化细胞系,且该细胞系中存在MLH1 R217C及BRAF V600E突变,该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型。
- 郝伟静于洋王青松赵丽叶艳董莉李健森孟祥睿运新伟高明
- 关键词：细胞培养技术永生化细胞系MLH1BRAF
- 诱导型狨猴肝纤维化模型的建立
- 2014年
- 目的:建立诱导型狨猴肝纤维化模型。方法:手术切除普通狨猴部分肝脏,通过腹腔注射二乙基亚硝胺(DENA-2.5 mg/kg),并利用体质量和肝功能检测、病理分析、免疫组化,胶原染色和B超小动物活体成像等手段进行监测。结果:手术切除肝脏促使狨猴肝脏再生,并伴随肥大和炎症反应;DENA药物诱导会引发与人类类似的肝脏炎症,肝脏胶原聚集和血管增生,最终导致狨猴肝脏纤维化。结论:手术切肝联合DENA化学诱导可以成功获得狨猴肝纤维化模型。
- 李萌乾王青松郭正隆尹海芳
- 关键词：肝纤维化二乙基亚硝胺肝切除
- CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建被引量：1
- 2017年
- 目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sg RNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况。结果测序结果显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA表达载体插入序列完全正确。将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高。结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。
- 鲁卓林熊显佳吴云丹周慧贾军王双林武莉莉刘艺洁乔阳杨冰赵秀娟王青松韩春勇张玲孙琰
- 关键词：甲基化EZH2基因
- 2′-O-甲氧乙基反义寡核苷酸应用于杜兴肌肉萎缩症的体外研究
- 2012年
- 目的:通过对反义寡核苷酸2′-O-甲氧乙基(2′-O-MOE)化学结构的体外实验,为杜兴肌肉萎缩症基因治疗方法提供一种候选的反义寡核苷酸药物。方法:在杜兴肌肉萎缩症小鼠H2K mdx细胞上转染不同长度和骨架修饰的2′-O-MOE反义寡核苷酸,利用RT-PCR技术检测其诱导外显子跳读的情况。结果:3种2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸体外诱导外显子跳读的效率显著高于目前临床检测的药物2′OmePS,表现出一定的浓度效应和时间效应。并且MOE25(PS)诱导外显子跳读的效率最好。结论:2′-O-MOE修饰的反义寡核苷酸能够有效地诱导H2K mdx细胞外显子跳读。
- 杨璐王青松高先军赵靖雯韩刚尹海芳
- 关键词：反义寡核苷酸
