杨东
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 林麝IL-1β基因的克隆、表达及生物学活性检测被引量：1
- 2013年
- 旨在克隆和表达林麝IL-1β,为其用于林麝疾病的防治奠定基础。从林麝外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增IL-1β(Interleukin-1β)基因。将IL-1β成熟肽编码序列连接到pET32a(+)原核表达载体进行表达,纯化目的蛋白并检测其生物学活性。序列分析表明,林麝IL-1β开放阅读框(ORF)长801bp,编码266个氨基酸,且在反刍动物中高度保守。IPTG诱导林麝IL-1β融合蛋白(MB-rIL-1β)表达,得到约35ku的目标带,且大部分以可溶形式存在。对上清蛋白分离纯化得到约35ku的单一条带。细胞增殖试验结果显示,林麝IL-1β融合蛋白能明显促进小鼠成纤维细胞(L929)增殖,表明其具有生物学活性。运用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达具有生物学活性的MB-rIL-1β融合蛋白。
- 邹丹丹杨东姜立春邹方东
- 关键词：林麝IL-1Β原核表达蛋白纯化活性检测
- 大熊猫FOXL2基因的克隆、序列分析及表达被引量：1
- 2012年
- 从大熊猫基因组中克隆了FOXL2基因,并对其进行序列分析及原核表达和真核表达。将FOXL2编码区序列克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出FOXL2重组蛋白。成功构建了真核表达载体FOXL2-pcDNA3.1/V5-HisC,并通过脂质体介导转染HEK293细胞,Western blot检测FOXL2蛋白表达。SDS-PAGE分析表明,FOXL2重组蛋白在诱导4h后表达量达到峰值,其大小约为58.9kDa,Western blot分析结果显示重组蛋白能够被抗His单克隆抗体特异性识别。FOXL2基因的克隆及其表达为进一步进行FOXL2的活性检测以及应用研究奠定了基础。
- 袁红英杨东王高超谭帅邹方东
- 关键词：大熊猫FOXL2基因克隆与表达
