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2024年8月5日星期一

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人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响: 目的通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染入骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡...; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春孙聪杨静杨彤涛周勇马保安

microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响被引量：7: 2013年; 目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。; 颜世举靳雷肖春王鑫孙聪张开亮裘秀春马保安范清宇; 关键词：软骨细胞骨关节炎细胞增殖

siRNA干扰FoxM1基因表达对人骨肉瘤MG63细胞增殖与凋亡影响研究被引量：11: 2014年; 目的通过抑制骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因表达,观察对骨肉瘤细胞系增殖与凋亡的影响。方法采用蛋白质印迹法检测不同人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中FoxM1基因的表达。将骨肉瘤细胞株MG63分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染FoxM1特异性siRNA(FoxM1-siRNA),阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做处理。实时-聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法检测转染前后FoxM1基因在mRNA及蛋白表达水平的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中存在FoxM1基因的表达。实验组MG63细胞转染siRNA后,FoxM1的mRNA表达为0.39±0.09,低于阴性对照组的0.91±0.07,t=7.92,P<0.001;也低于空白对照组的0.96±0.08,t=8.68,P<0.001。实验组FoxM1蛋白表达为0.31±0.06,显著低于阴性对照组的0.81±0.10,t=7.20,P<0.001;也低于空白对照组的0.89±0.09,t=8.35,P<0.001。实验组MG63细胞增殖率为0.36±0.03,显著低于阴性对照组的0.61±0.02,t=12.86,P<0.001;也低于空白对照组的0.65±0.02,t=14.92,P<0.001。实验组MG63细胞凋亡率为(13.69±1.15)%,显著高于阴性对照组的(2.38±0.90)%,t=14.16,P<0.001;也高于空白对照组的(2.87±0.86)%,t=13.54,P<0.001。结论人骨肉瘤细胞株中存在FoxM1蛋白的表达;特异性siRNA可下调骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因的表达,对细胞的增殖具有负性调控作用,并能诱导细胞凋亡。; 颜世举肖春靳雷王鑫韩康马保安范清宇; 关键词：骨肉瘤 FOXM1 RNA干扰

人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响: 目的通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡...; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春孙聪杨静杨彤涛周勇马保安; 关键词：慢病毒骨肉瘤

周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响被引量：1: 2014年; 目的:以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果:各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论:10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。; 肖春颜世举靳雷王鑫裘秀春范清宇马保安; 关键词：IL-1Β MMP-3

人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响: 2014年; 目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:构建沉默及过表达microRNA-194的慢病毒载体;获得稳定感染的细胞株,改变细胞增殖相关生物学特性。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;microRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖速度相较于其对照组明显上升;过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞增殖速度显著下降(P<0.01)。MicroRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞凋亡率相较于其对照组明显下降,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。与对照组比较,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对SOSP一9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。MicroRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春孙聪杨静杨彤涛周勇马保安; 关键词：慢病毒骨肉瘤

人工腰椎间盘置换研究应用进展被引量：1: 2014年; 椎间盘病变是脊柱外科的常见疾病,是成年人疼痛和致残的常见原因,常常给人带来沉重的肉体和经济负担。经过长时间的发展与脊柱外科手术的进步,常规手术治疗在临床上虽然取得了一定的疗效,但是没有保留脊柱的生理运动功能,对临近阶段的椎间盘的退变起到促进作用,并且腰椎运动节段的融合加快了邻近节段椎间盘和小关节的退变。腰椎独特的解剖学特点和生物力学的研究及不同材质和特点的人工椎间盘材料的发展使人工椎间盘手术成为可能。与常规手术方式相比,人工椎间盘假体设计与人生理的解剖结构更加吻合。术后可以保持瞬时和长期的稳定性,从而对邻近的椎间盘的退变起到抑制作用。取得了较好的疗效。人工椎间盘置换术作为治疗腰椎间盘除腰椎融合之外的另一合理选择,目的是使退变导致的疼痛可以稳定长期缓解,并重建椎间隙高度以保护神经,从而避免晚期关节突关节及邻近节段的病变,恢复脊柱的运动学和载荷特性。目前人工腰椎间盘有了长远的发展,适应症不断扩大,但仍有较多限制。期待在将来能够找出更加符合人体生物力学特点的材料和设计,使之成为一种更为有效的治疗腰椎疾病的治疗方式。现就人工椎间盘的类型、疗效、适应证、禁忌证以及术后并发症等方面予以综述。; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春沙浩董川杨彤涛周勇马保安; 关键词：人工椎间盘疗效并发症

MicroRNA-194过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及对骨肉瘤细胞转染与筛选的方法学研究: 2014年; 目的:构建针对人microRNA-194过表达及抑制表达的慢病毒表达载体,寻找与探讨感染人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os的最佳步骤和方法。方法:利用PCR方法调取相应目的基因进行酶切,经电泳回收后与目的基因进行连接,产物转化细菌感受态细胞,对克隆进行PCR鉴定和测序对比分析后,构建相应microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体;在人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os转染及筛选过程中,根据不同阶段及浓度设定相应实验组,并设相应对照组。倒置显微镜观察转染效率,筛选情况,进行比较。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确。过表达及抑制表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml。感染复数(multiply of infection,MOI)值测定,实验组及对照组转染效率无明显差异,获得MOI值及感染时间数据。通过新的综合设计,经筛选后获得转染效率满意的目的克隆细胞。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体,并通过新的综合考虑设计,对人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os进行转染和筛选后,可较快和较高效率获得满意目的细胞。; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春孙聪杨静杨彤涛周勇马保安; 关键词：慢病毒骨肉瘤嘌呤霉素

利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响: 目的通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周...; 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春沙浩董川杨彤涛周勇马保安

人软骨细胞压力实验模型的建立与评估: 2014年; 目的:人承重关节内受到的多种机械应力(剪切力、张力、静水压力等)在调节关节软骨细胞的生理功能方面起着重要作用。建立对人膝关节软骨细胞施加不同强度周期性静水压的压力模型,观察不同压力强度下软骨细胞的生长形态、增殖和凋亡情况。方法:采用酶消化法分离培养正常成人膝关节软骨细胞,将培养的第3代软骨细胞分为6组:对照组、0.5 MPa组、1.0 MPa组、3.0MPa组、5.0 MPa组、8.0 MPa组,应用高压恒温静水压加载系统分别给予各组不同强度压力作用5 d,每日1 h。甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法鉴定软骨细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态和生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线。结果:与对照组相比,0.5 MPa、3.0 MPa组无明显差异(P>0.05);1.0 MPa组能促进软骨细胞增殖,抑制凋亡(P<0.05);5.0 MPa组出现细胞增殖能力下降,细胞活力降低,凋亡率增加(P<0.05);8.0 MPa组则表现出明显的细胞增殖的抑制和细胞凋亡趋势(P<0.05),以及细胞形态学的改变。结论:不同强度的周期性压力对人软骨细胞的新陈代谢产生了不同影响,尤其在软骨细胞的增殖和凋亡水平方面。利用本压力实验模型能体外模拟人负重关节软骨细胞的受压情况,初步确定了人软骨细胞压力实验中压力梯度的选择。为软骨细胞的压力损伤研究提供了实验数据,为进一步探寻压力作用与骨关节炎的关系提供了实验平台。; 王鑫靳雷肖春颜世举孙聪张开亮裘秀春范清宇马保安; 关键词：人软骨细胞

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