刘书虎
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南方医科大学基础医学院神经生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-124a通过抑制iASPP基因表达促进神经突起生长被引量：4
- 2014年
- 目的探索miR-124a的靶基因iASPP对神经发育的影响。方法利用在线预测软件TargetScan对miR-124a的靶基因进行预测,结合文献资料提到的与神经早期发育有关的基因进行筛选,我们选择iASPP作为miR-124a的候选靶基因。通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证,然后在M17细胞中转染miR-124a过表达质粒,用Western blotting实验检测iASPP蛋白表达水平的变化。利用视黄酸诱导M17细胞作为神经元分化模型,通过过表达或者基因干扰的方法,初步探讨iASPP基因对神经发育的影响。结果 miR-124a促进神经突起发育,并且能够与iASPP基因的3'非翻译区(3'UTR)相互作用来抑制其蛋白质的表达;iASPP基因的过表达抑制神经突起的发育并且抑制miR-124a促进神经突起生长的作用。结论 miR-124a能够通过抑制iASPP基因的表达来促进神经突起生长。
- 林利芳谷溪刘书虎王雪敏
- 关键词：IASPP神经发育突起生长
- 组蛋白脱乙酰化酶4N-末端和C-末端片段的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中分别表达组蛋白脱乙酰化酶4(HDAC4)N-末端(1-1950bp)和C-末端(1708-3255bp)片段与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并进行纯化。方法应用PCR方法扩增HDAC4N-末端和C-末端片段,将目的基因插入GST融合载体pGEX-6P-1中,重组载体在酶切鉴定和序列测定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达产物后,用谷胱苷肽琼脂糖珠纯化目的蛋白。结果经测序、酶切鉴定证明成功构建了融合蛋白表达质粒,表达出的融合蛋白经SDS-PAGE分析其相对分子量约为110500和93080。Western blotting分析证实融合蛋白可以被HDAC4特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可以进一步用于HDAC4与其他蛋白质相互作用的研究。
- 杨洋覃小翠刘书虎黄威王雪敏
- 关键词：原核表达融合蛋白
