苗海生
- 作品数：49 被引量：136H指数：7
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 2020年云南省边境地区牛蓝舌病血清学调查被引量：3
- 2022年
- 为了解蓝舌病(bluetongue,BT)在云南边境地区的流行和分布情况,2020年采用竞争ELISA方法,在云南省边境地区12个县市随机采集135个养殖场、活畜交易市场和散养户的3800份牛血清样品进行蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)抗体检测。结果显示:12个边境县市均检出阳性血清样品,平均样品阳性率为77.9%,场户阳性率为93.3%;样品阳性率有一定的地区差异,其中陇川县最高(92.0%),孟连县最低(48.0%),差异存在统计学意义(P<0.05);境外牛血清样品阳性率(84.8%)显著高于本地牛(67.9%),P<0.05;不同饲养方式下的样品阳性率存在差异,其中舍饲最高(81.4%),半放牧半舍饲(62.5%)最低,P<0.05;黄牛样品阳性率(80.0%)明显高于水牛(61.4%),P<0.05。结果推断,BT在云南边境地区可能广泛存在且流行严重,需要持续开展血清学调查、监测,重点加强对境外牛的控制。本研究为我国西南边境地区BT防控提供了数据参考。
- 寇美玲杨佳萍谢佳芮苗海生
- 关键词：蓝舌病边境地区竞争ELISA阳性率
- 云南边境地区帕利亚姆血清群中山病病毒的分离与鉴定
- 2022年
- 【目的】了解西南边境地区牛感染中山病病毒(Chuzan virus,CHUV)的情况。【方法】应用BHK21细胞对云南景洪、江城采集的312份健康黄牛血液样品盲传分离病毒,对出现细胞病变的毒株进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,对分离到的病毒进行S7、S2基因序列测定和比对分析。【结果】4份血液样品可致BHK21细胞病变,电镜观察病毒颗粒呈球形,直径约50 nm;琼脂糖凝胶电泳发现,4株分离毒株基因组为10节段,带型为“3-3-4”,与2012年云南师宗分离的CHUV SZ187毒株相似;4株病毒S7、S2基因核苷酸序列相似性分别为98.7%~99.7%和97.9%~99.1%;S2基因片段核苷酸和氨基酸序列与中国本土分离的SZ187、GHN-GS-16等毒株相似性最高;S7基因片段核苷酸和氨基酸序列与日本分离的ON-1/E/18、ON-3/E/17及中国本土的SZ187、GHN-GS-16等毒株的相似性最高。S7、S2基因遗传进化分析结果显示,4株新分离毒株亲缘关系最近;4株毒株的S7基因序列与中国本土和日本分离的已知帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)毒株位于同一分支,提示4株毒株为PALV,且形成一簇,有一定的地域性;4株毒株S2基因片段核苷酸序列与中国本土分离的CHUV位于同一分支,亲缘关系较近,进一步证实这4株毒株为CHUV。【结论】本研究首次报告了从云南边境地区牛群中分离到CHUV毒株,为CHUV在中国的流行病学和边境地区疫病风险防控提供了重要参考及有力依据。
- 寇美玲苗海生李乐谢佳芮李华春宋建领
- 口蹄疫病毒群特异性RT-LAMP检测技术的建立及试用被引量：2
- 2022年
- 为实现对口蹄疫病毒(FMDV)感染的现场快速检测,本研究于GenBank下载全球具有代表性的107条血清O型、A型和Asia-1型FMDV基因组序列,截取并比对FMDV高度保守的3D(RNA聚合酶)基因序列,设计17套环介导等温扩增引物,并对反应体系和反应条件进行优化,建立FMDV群特异性RT-LAMP技术。该技术在反应前用石蜡密封PicoGreen染料,实现了免开盖可视化判定检测结果;该技术对PRV、PRRSV、AKAV、BTV-1、BTV-16、EHDV、CHUV等偶蹄动物病毒未见非特异性扩增;最低可检测3.4×10;ng/μL的病毒RNA,灵敏度是RT-qPCR技术的10倍,是一步法RT-PCR的100倍;尝试应用RT-LAMP对94份RNA临床样品进行检测比对,该检测方法与RT-PCR方法和RT-qPCR方法对临床样品检测的符合率均为82.8%。本研究建立的FMDV群特异性RT-LAMP快速核酸检测技术,具有准确性高、快速简便的优点,可用作家畜FMDV早期感染的现场诊断技术。
- 谢佳芮寇美玲苗海生
- 关键词：口蹄疫病毒
- 2021年云南省边境地区牛口蹄疫血清学调查被引量：2
- 2022年
- 为了解云南省边境地区牛口蹄疫(FMD)免疫情况,对2021年采自云南省7个边境县市的1522份牛血清样品,采用O、A型口蹄疫病毒(FMDV)cELISA抗体检测试剂盒及FMDV结构蛋白单抗阻断ELISA试剂盒进行抗体检测。结果显示:O、A型抗体阳性率平均分别为57.61%、67.29%,未达到70%的国内最低免疫标准;勐腊、盈江两地非结构蛋白抗体阳性率偏高,分别为57.50%、54.62%;入境牛O型、A型、非结构蛋白抗体阳性率分别为70.29%、79.70%、58.23%,本地牛分别为54.31%、63.87%、40.52%,差异显著(P<0.05);规模场、散养户、隔离场的O型抗体阳性率分别为61.04%、52.24%、70.29%,A型抗体阳性率分别为63.73%、63.12%、79.70%,非结构蛋白抗体阳性率分别为37.78%、42.31%、58.52%,隔离场阳性率场显著高于规模场和散养户(P<0.05)。结果表明:云南省边境地区FMDV免疫抗体水平不高,且存在一定的病毒传入风险,需持续开展血清学调查和监测,提高疫苗接种强度,降低FMDV向国内扩散的风险。
- 寇美玲谢佳芮廖德芳宋建领苗海生
- 关键词：口蹄疫边境地区血清学检测免疫抗体
- 应用噬菌体展示7肽文库技术进行蓝舌病1型病毒VP2蛋白表(拟)位分析被引量：1
- 2015年
- 为了对蓝舌病1型病毒(BTV1)VP2蛋白表位进行定位,本研究利用BTV1型特异性抗体淘选噬菌体展示的7肽随机肽库,进行VP2蛋白表(拟)位分析。对筛选获得共有序列噬菌体,采用ELISA和竞争性ELISA分析不同噬菌体拟位与BTV1型特异性抗体的免疫反应性,结果显示含有TTPNNLS基序的噬菌体拟位能够与BTV1型特异性抗体发生特异性结合,并且该结合能够被BTV1抑制或阻断,表明拟位多肽真实模拟病毒蛋白上与BTV1型特异性抗体结合的抗原决定簇或表位。本研究揭示了BTV1 VP2蛋白的865THPNKCLVA873位氨基酸构成BTV1 VP2蛋白特异性表位,为该病的免疫机理研究奠定了基础。
- 熊和丽宋建领王金萍苗海生李华春
- 关键词：型特异性抗体表位
- 猪致病性大肠杆菌耐药性与整合子-基因盒的相关性被引量：5
- 2019年
- 为了解猪致病性大肠杆菌耐药性与整合子-基因盒的相关性,本研究采用腹腔注射法测定52株大肠杆菌对昆明小鼠的致病性;采用K-B法测定致病性大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性;对致病性大肠杆菌Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型整合子及其基因盒进行PCR检测及测序分析,并分析其整合子-基因盒与耐药性的相关性。结果显示,52株大肠杆菌对小鼠均具有较强致病性,96.15%分离株对15种抗菌药物表现为多重耐药性,61.54%分离株耐药性均在八重耐药以上。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型整合子阳性率分别为84.62%,15.38%和3.85%。Ⅰ型整合子检测到dfrA17-aadA5(18.18%)、dfrA12-orfF-aadA2(4.55%)和dfrA1-catB3-aacA4(4.55%)基因盒,Ⅱ型整合子检测到dfrA1-sat2-aadA1(50.00%)基因盒,Ⅲ型整合子未检测到基因盒,基因盒阳性率与细菌耐药性不存在相关性。
- 李富祥廖德芳李楠苗海生宋建领赵文华杨仕标李华春
- 关键词：大肠杆菌整合子基因盒
- 口蹄疫病毒通用型RT-RAA-LFD快速检测方法的建立
- 2024年
- 为建立一种操作简便、有效的口蹄疫病毒(FMDV)核酸通用型检测方法,以FMDV 3D基因为靶基因,设计标记引物及探针,建立了一种新的检测FMDV的反转录-重组酶介导链置换核酸扩增结合侧流层析试纸检测(RT-RAA-LFD)方法。该方法操作简便,耗时短,40Î35 min内即可完成检测,通过肉眼观察可判定结果;具有较好的覆盖面,能够检出我国O型、A型FMDV主要流行拓扑型病毒,与猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等其他猪病病原无交叉反应;对RNA标准品的最低检测限为10-7拷贝/μL,敏感性较高。利用建立的FMDV RT-RAA-LFD方法对5份临床样品进行检测,其结果与RT-PCR结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV RT-RAA-LFD方法具有快速、直观、特异强、重复性好等优点,适合在基层兽医防疫部门和养殖场推广应用。
- 寇美玲谢佳芮李占鸿张振兴苏晓航王轶男宋建领苗海生
- 关键词：口蹄疫病毒
- 云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施
- 本文报告云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果，并在监测的基础上提出相应的防控措施。2011年度，云南省现代农业(奶牛)产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖...
- 杨仕标信爱国赵文华王金萍李富祥胡骑苗海生
- 关键词：水牛血清学口蹄疫布氏杆菌病防控措施
- 口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度符合性研究被引量：4
- 2009年
- 血清中和抗体滴度的大小反映血清对病毒感染的中和能力,其是评价疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标,而液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)是一种通过ELISA检测抗体滴度的方法,因此研究LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度的关系对疫苗评价和理论研究有重要意义。本研究采用野外采集的90份牛血清进行了中和试验和LPB-ELISA试验,结果表明中和抗体滴度和LPB-ELISA抗体滴度具有相关性,相关系数为0.642,但是试验证明有41%中和抗体阴性样品会被LPB-ELISA检测为阳性,通过改变LPB-ELISA的阳性判断标准,采用抑制率>0.7的抗体滴度计算方法和1/8判定标准,可以使改进的LPB-ELISA的计算结果和中和试验结果更好的符合,降低假阳性率,使LPB-ELISA更适合进行口蹄疫血清学监测和普查。
- 李乐苗海生胡骑朱明旺李华春
- 关键词：口蹄疫抗体滴度
- 云南省边境地区牛阿卡斑病毒血清学调查被引量：4
- 2022年
- 为掌握云南省边境地区牛群中的阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)流行情况和分布特征,采用竞争ELISA检测方法,对2019—2020年采自云南省边境地区10个县市的牛群血清样品进行AKAV抗体检测与分析。结果显示:在采集的4437份牛血清样品中,检出抗体阳性样品1367份,平均抗体阳性率为30.81%;2019年抗体阳性率为27.88%,2020年为32.14%,差异不显著(P>0.05);入境牛抗体阳性率显著高于本地牛(P<0.05);养殖场抗体阳性率略高于散养户和交易市场,但三者间差异不显著(P>0.05);舍饲牛群的抗体阳性率显著高于半放牧半舍饲和系牧饲养(P<0.05),黄牛的抗体阳性率明显高于水牛(P<0.05)。结果表明,云南省边境地区存在一定程度的AKAV感染且有加重趋势,入境牛感染风险较高,需持续开展血清学调查和监测,加强境外牛的检疫和移动控制,降低AKAV向内地扩散的风险。本研究摸清了云南省边境地区牛群中的AKAV流行本底,为今后该病毒流行控制策略的研究与制定提供了参考。
- 寇美玲谢佳芮苗海生
- 关键词：边境地区竞争ELISA阳性率流行病学
