王君
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Livin促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭作用的实验研究
- 2013年
- 目的:探讨凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员Livin基因在骨肉瘤发生发展以及转移中的作用。方法:联合RNA干扰和质粒重组技术构建Livin基因短发夹RNA(shRNA)表达载体,筛选稳定沉默Livin表达的克隆。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖状况。划痕实验(Wound healing)和侵袭实验(Matrigel invasion assay)评价沉默Livin表达后细胞迁移和浸润能力的变化。免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白Cyclin D1和基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)的蛋白表达变化。结果:shRNA稳定转染的骨肉瘤U2-OS细胞中Livin mRNA和蛋白水平明显下调。与对照组相比,细胞增殖,游走和侵袭能力明显下降,并且该克隆中Cyclin D1,MMP-2和MMP-9的蛋白表达也明显减弱。结论:凋亡抑制蛋白Livin能够在体外条件下促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭作用,这一过程可能与Cyclin D1和MMP-2,9的表达增强有关。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺王立国王君范广宇
- 关键词：LIVIN骨肉瘤
- 曲古抑菌素A通过p53转录激活途径诱导尤文肉瘤细胞凋亡
- 2013年
- 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶(cleaved-PARP),p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达。实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响。结果:TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加。TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平。另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺王立国王君范广宇
- 关键词：曲古抑菌素A尤文肉瘤P53凋亡
