杜晓楠
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市教委科技计划面上项目北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-37对粉尘螨诱导气道上皮及固有免疫细胞产生IL-6的作用研究被引量：8
- 2017年
- 目的探讨气道上皮细胞及固有免疫细胞经粉尘螨刺激后,白细胞介素37(interleukin 37,IL-37)对其产生细胞因子IL-6的影响。方法体外培养人肺泡上皮细胞系A549、小鼠肺上皮细胞系MLE-12、小鼠巨噬细胞系RAW264.7和原代小鼠固有淋巴样2型细胞(ILC2细胞),当细胞融合度达70%时,用IL-37预处理2 h,再给予粉尘螨粗提物刺激细胞,每种细胞均设PBS、IL-37及粉尘螨对照,并分别于不同时间点收集细胞沉淀和细胞培养液上清;用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测细胞因子IL-6在mRNA水平上的变化,用双抗体夹心ELISA检测细胞因子IL-6在蛋白水平的变化,用流式细胞术分选ILC2细胞并检测ILC2细胞表面IL-37受体的表达情况。结果粉尘螨粗提物可促进A549细胞、MLE-12细胞、RAW264.7细胞和ILC2细胞表达I L-6,且呈时间依赖的方式(P<0.05)。IL-37可抑制粉尘螨粗提物所诱导的IL-6在A549细胞、MLE-12细胞和RAW264.7细胞表达(P<0.05);但IL-37对粉尘螨粗提物刺激ILC2细胞分泌IL-6无明显抑制作用(P>0.05)。结论IL-37可抑制粉尘螨诱导的气道上皮细胞和巨噬细胞产生IL-6,并可通过负向调控下调气道炎症反应,为IL-37在哮喘治疗中的潜在应用提供了实验依据。
- 陈诗皓杜晓楠李艳吕喆秦啸峰孙英王炜
- 关键词：粉尘螨白细胞介素6
- 靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对关节炎模型鼠保护作用研究
- 研究背景：肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)成员TNF-α和RANKL在介导类风湿性关节炎(RA)炎症和骨破坏中发挥协同作用。与传统生物制剂相比，拮抗TNF-α和RANKL的双靶标人源化抗体可以更好地缓解滑膜炎症及骨破坏。
- 娄苇苇杜晓楠袁慧慧赵文明
- 关键词：类风湿关节炎TNF-ΑRANKL
- IL-33通过活化巨噬细胞NF-κB信号通路参与低氧性肺动脉高压的发生发展被引量：7
- 2018年
- 目的探讨IL-33/ST2应答轴是否通过激活巨噬细胞NF-κB通路促进低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)的发生、发展。方法采用野生型(WT)、IL-33转基因(Il33 Tg)小鼠和St2基因敲除(St2-/-)小鼠制备HPH小鼠模型,采集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织标本;进行小鼠BALF总细胞和分类计数;用免疫荧光和免疫组化法检测IL-33、ST2在小鼠肺组织的表达水平和MAC-2+巨噬细胞聚集;用ELISA检测肺组织匀浆中的细胞因子含量;用免疫印迹(Western blot)检测转录因子NF-κB在模型鼠肺组织及体外IL-33刺激的小鼠巨噬细胞系RAW264.7的表达水平。结果 IL-33、ST2在HPH模型小鼠肺组织中表达上调并伴有MAC-2+巨噬细胞增加;Il33 Tg模型鼠肺部以巨噬细胞为主的炎性细胞浸润;低氧可诱导WT小鼠肺组织表达促炎因子IL-1β和巨噬细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1),而St2基因缺失则下调上述细胞因子表达;低氧亦可诱导上调NF-κB在WT小鼠肺组织表达,而St2基因缺失则可抑制低氧诱导NF-κB的表达。体外实验显示IL-33能上调巨噬细胞NF-κB的表达。结论低氧可促进IL-33/ST2表达增强,进而诱导巨噬细胞内NF-κB通路的激活,导致促炎细胞因子MCP-1、IL-1β的产生,加重炎症反应并间接引起肺动脉血管重塑参与HPH的发生、发展。
- 刘杰沙宇惠高阳杜晓楠王文俊黄琼孙英王炜
- 关键词：巨噬细胞核因子ΚB低氧性肺动脉高压
- 致病菌金黄色葡萄球菌及肺炎链球菌代谢产物及菌体成分对人呼吸道上皮细胞结构与功能的影响被引量：5
- 2019年
- 目的探究呼吸系统常见致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S. pneumonia)不同成分对人呼吸道肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)结构与功能的影响。方法 A549细胞分别与S.aureus、S. pneumonia细菌培养上清、细菌裂解物及灭活菌体共培养,采用CCK8方法检测上述不同细菌成分对A549细胞增殖功能的影响,采用流式细胞术(flow cytometry)检测不同刺激物诱导细胞发生凋亡与坏死的作用,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其对炎症细胞因子白细胞介素6、白细胞介素8(IL-6、IL-8)分泌的影响,利用Western blot及细胞免疫荧光染色方法探究不同刺激成分对A549细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin1、Occludin表达的影响。结果两种细菌培养上清及S. pneumonia裂解物可显著抑制A549细胞增殖并诱导细胞出现凋亡和坏死现象(P<0.05);两种细菌培养上清及细菌裂解物均可促进上皮细胞分泌IL-6,且两种细菌培养上清及S. pneumonia裂解物亦可促进上皮细胞分泌IL-8;两种细菌培养上清及各成分,仅S. aureus灭活菌体可降低紧密连接蛋白ZO-1的表达,但其对另外两种紧密连接蛋白Claudin1和Occludin的表达无显著影响。结论两种细菌感染过程中,不同细菌及细菌的不同成分对上皮细胞作用并不完全相同。细菌培养上清和细菌裂解物主要影响上皮细胞增殖、炎症因子分泌等功能,S. aureus灭活菌体可降低紧密连接蛋白ZO-1的表达进而影响上皮细胞间紧密连接的完整性。
- 张鑫秦啸峰黄琼杨义然杜晓楠李琴吕喆陈彦王炜孙英
- 关键词：金黄色葡萄球菌肺炎链球菌上皮细胞
- 靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对关节炎模型鼠保护作用研究
- <正>研究背景:肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)成员TNF-α和RANKL在介导类风湿性关节炎(RA)炎症和骨破坏中发挥协同作用。与传统生物制剂相比,拮抗TNF-α和RANKL的双靶标人源化抗体可以更好地缓解滑膜炎症及骨...
- 娄苇苇杜晓楠袁慧慧赵文明
- 关键词：类风湿关节炎TNF-ΑRANKL
- 文献传递
- 靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对DBA/1小鼠单关节炎的保护作用被引量：2
- 2017年
- 目的制备同时拮抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κB受体活化因子配体(re-ceptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的人源化单克隆抗体(h8G12),通过单关节炎小鼠模型,评估h8G12在抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏中的保护作用。方法培养稳定表达h8G12的CHO细胞株,观察细胞生长状态,用间接ELISA检测细胞培养上清中h8G12的表达水平。纯化的h8G12经SDS-PAGE、West-ern blot分析及鉴定,用间接ELISA观察其亲和力。通过向DBA/1小鼠膝关节腔注射人TNF-α重组蛋白和人RANKL重组蛋白,建立单关节炎小鼠模型。用组织学评估观察不同给药方案[阴性对照组、阳性对照组、阿达木单抗(adalimumab,ADA)组和h8G12组]对小鼠单关节炎引起的炎症浸润、软骨侵蚀、膝关节腔内破骨细胞分化的保护作用。结果 CHO细胞株培养96 h时细胞生长状态良好,可稳定分泌h8G12;纯化的h8G12纯度可达90%,Western blot可见特异性条带,且可与rh TNF-α和rh RANKL结合。在单关节炎小鼠模型中,苏木精-伊红染色显示,h8G12组关节腔、周围软组织及骨髓腔内炎性细胞浸润明显少于阳性对照组,炎症评分降低了50%,治疗效果与ADA相似。甲苯胺蓝染色显示,h8G12组病理评分出现显著下降,h8G12治疗后小鼠关节结构相对完好,关节软骨厚度接近正常水平。抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,h8G12组关节腔内破骨细胞明显减少。结论 h8G12可有效抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏,为类风湿关节炎的治疗提供了新方法。
- 娄苇苇杜晓楠袁慧慧窦云鹏赵文明李慎涛
- 关键词：肿瘤坏死因子Α核因子ΚB受体活化因子配体
