- 实时荧光PCR检测结核杆菌DNA的分析灵敏度验证及临床应用被引量：8
- 2017年
- 目的以结核杆菌DNA检测为切入点,建立实时荧光PCR定性方法分析灵敏度验证的方法并进行评价。方法取5个低浓度标本分别平行检测16次,计算每个标本的检出率,分别以浓度的对数(以10为底)、Ct值和检出概率作曲线拟合,得到结核杆菌DNA荧光PCR检出率为50%和95%所对应的浓度及Ct值,并据此建立结果报告策略。以巢式PCR和实时荧光PCR同时检测52例临床标本,评价所建立的结果报告策略的适用性。结果结核杆菌DNA检出率为50%和95%所对应的浓度分别为69copy/mL,2.46×10~3 copy/mL。所建立的结果报告策略为结果大于2.46×10~3 copy/mL时报告阳性,结果小于2.46×10~3 copy/mL而大于69copy/mL时进行复查,如果复查为阳则报告阳性,如果复查结果为阴性时报告为阴性,结果小于69copy/mL报告为阴性。52例临床标本经检测后,荧光PCR检出6例阳性,巢式PCR检出4例阳性,计算kappa值经u检验(kappa=0.78,u=3.58,P<0.05)表明两种方法报告的结果具有良好的一致性。结论依据检出概率-浓度曲线制定结核杆菌-DNA荧光PCR定性方法结果报告策略具有较好的临床适用性,依据最低检出限制订结果报告策略可应用于基于定量数据的定性PCR。
- 张鸿娟宋宇郭翀赵滢刘子杰
- 关键词：结核杆菌最低检出限
- 呼吸道病原体核酸恒温扩增芯片十三联检在下呼吸道感染常见病原体基因中的检测被引量：32
- 2017年
- 目的探讨呼吸道病原体核酸环介导恒温扩增芯片法(Loop-mediated amplification,LAMP)十三联检在下呼吸道感染常见病原体基因诊断中的价值.方法收集疑似下呼吸道感染患者的深部痰液或肺泡灌洗液样本122例,分别采用LAMP技术、病原体分离与培养、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测病原体,应用SPSS软件及Kappa检验将检测结果按标本类型、年龄段及检测方法进行比对分析.结果 122例呼吸道感染患者标本中,痰液病原体阳性率(55.56%)高于肺泡灌洗液阳性率(46.88%),病原体种类分别以耐甲氧西林葡萄球菌(MASA)和肺炎支原体(MP)为主(P<0.05);高年龄段(≥60岁)以检出MASA为主,而低年龄段(≤20岁)以检出MP为主(P<0.01);LAMP十三联检阳性检出率(50.00%)高于病原体分离培养的阳性检出率(36.67%),2种检测方法对肺炎克雷伯菌(Kpn)和鲍曼不动杆菌(CSAB)的检出率具有一致性(Kappa>0.4),而其它病原体阳性结果的一致性较低(Kappa<0.4);LAMP与实时FQ-PCR法对MP的检测结果具有较高的一致性(Kappa>0.7).结论呼吸道病原体LAMP十三联检具有快速、灵敏、高效、特异及病原体覆盖面广的优势,可对临床提供快速可靠的实验室诊断依据.呼吸道标本类型及检验方法不同,其病原体检验结果也可能有所不同,各具优缺点,需要临床医生给予密切关注.
- 唐睿珠罗正琼徐秋月赵滢李欢王云娟宋宇刘子杰
- 关键词：下呼吸道感染病原体
