刘杰
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞胆固醇外流率的测定以及细胞外胆固醇和脂多糖对其的抑制作用被引量：4
- 2016年
- 背景:胆固醇与动脉粥样硬化等疾病的发生、发展密切相关。目前研究细胞胆固醇动态变化的方法有局限性。目的:通过BODIPY-Cholesterol标记RAW 264.7小鼠巨噬细胞,检测细胞胆固醇的外流率,并研究细胞外胆固醇浓度和脂多糖对其的影响。方法:RAW264.7细胞采用含有体积分数10%FBS的DMEM培养基体外培养,再用0.025 mmol/L的BODIPY-Cholesterol标记细胞1,2,4,8 h,以无血清DMEM洗涤细胞后,再孵育细胞6,12,24,48,96 h,优化标记细胞的时间及孵育时间。分别采用胆固醇、脂多糖、异常高胆固醇人血清和正常胆固醇人血清处理细胞,再对其胆固醇外流率进行测定和比较。结果与结论:BODIPY-Cholesterol标记细胞2-8 h后,测定胆固醇外流率的结果较好。RAW 264.7小鼠巨噬细胞经过BODIPY-Cholesterol荧光染料标记2 h后,测定胆固醇外流率,发现其随外加胆固醇浓度(0.1,0.5,2.5 mmol/L)的增大呈递减趋势(P<0.01)。脂多糖刺激后细胞的胆固醇外流率降低(P<0.05)。采用高胆固醇人血清处理细胞后,胆固醇的外流率降低(P<0.05)。结果说明,利用BODIPY-Cholesterol可以定量测定细胞胆固醇外流率,并能研究环境中胆固醇和脂多糖对其的影响。
- 刘杰郑云梅田志辉常光明李海东
- 关键词：胆固醇脂多糖RAW
- 小鼠脾脏B淋巴细胞纯化培养方法的建立
- 2015年
- 背景:B淋巴细胞是机体免疫系统重要的参与者,目前的研究主要采用磁珠、补体等方法进行B淋巴细胞的分离纯化,但是这些方法费用高或者细胞损伤大、纯度低,体外分离、培养B淋巴细胞的方法还有待进一步改进。目的:探讨从小鼠脾脏细胞中对B淋巴细胞同时进行分离、培养的方法。采用加入白细胞介素4、脂多糖或者CD3单克隆抗体及其组合,探讨体外分离、培养小鼠脾脏B淋巴细胞的适宜条件。方法:体外分离培养小鼠脾脏细胞,随机分为7组,分别用白细胞介素4,CD3,脂多糖,白细胞介素4+CD3,白细胞介素4+脂多糖,CD3+脂多糖组进行干预、将未给予刺激的脾细胞作为对照组。用流式细胞仪检测在不同培养条件下小鼠脾脏细胞T、B淋巴细胞及其亚群的变化。结果与结论:与对照组比较,白细胞介素4组淋巴细胞在培养后第3-5天数量达到高峰;脂多糖组在培养初期无明显作用,第3天开始淋巴细胞数量有明显的增加,第5天达到高峰;培养体系中加入CD3单克隆抗体,可导致T淋巴细胞消失,培养2 d后,可得到较为单一的B淋巴细胞,其细胞数量在第3天达到高峰。其中B220+IgD+成熟B淋巴细胞亚群数量显著增加。体外培养24 h后,各组B220+CD93+Transitional B淋巴细胞亚群均完全消失。结果说明,体外培养的小鼠脾脏细胞加入CD3单克隆抗体和白细胞介素4可以去除T淋巴细胞,并维持成熟B淋巴细胞的生存和增殖。
- 李文娟邹家琦韩欣欣田志辉刘杰李海东
- 关键词：小鼠脾脏B淋巴细胞CD3单克隆抗体白细胞介素4脂多糖国家自然科学基金
