赵利芳
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：江苏科技大学生物与环境工程学院更多>>
- 发文基金：吉林市科技发展计划项目国家科技攻关计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段的原核表达及抗血清制备
- 2008年
- 本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增BSBSE片段,克隆到pMD18-T载体上,鉴定并测序正确后,构建pET32a-BSBSE表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE检测重组蛋白表达、Western blot检测重组蛋白反应原性。以该重组蛋白免疫兔制备抗血清,经间接ELISA检测抗血清效价。结果表明,PCR扩增得到1100bp的BSBSE片段,以此片段构建了pET32a-BSBSE表达质粒,经诱导后获得了目的蛋白表达,以Western blot检测该重组蛋白证明为本研究的目的蛋白,并且与抗体具有反应原性。以间接ELISA检测该重组蛋白免疫兔制备的抗血清效价达105。研究结果将为坏死梭杆菌毒力因子(lkt)的深入研究奠定了物质基础。
- 张秀华陈立志赵利芳刘晓颖路伟
- 关键词：坏死梭杆菌
- 坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达被引量：1
- 2009年
- 坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因。以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因SH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamHⅠ和HindⅢ酶切的目的片段SH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-SH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况。结果表明:扩增基因序列大小为1800bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经West-ern-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性。
- 赵利芳陈立志张秀华冯书章王克坚刘晓颖陆伟冯凯王秀东姚志利
- 关键词：坏死梭杆菌克隆
