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产果胶酶菌株——黑曲霉的复合诱变及产酶条件研究被引量：10: 2016年; 以产果胶酶菌株——黑曲霉YQ-13为出发菌株,通过紫外与氯化锂复合诱变反复处理,最终获得1株能够稳定遗传的突变菌株YQY-36,其果胶酶活力为67.6 U/m L,比出发菌株提高了2.44倍。应用PlackettBurrman设计筛选主要影响因素,通过最陡爬坡试验确定中心点后用响应面法对突变菌株YQY-36的发酵培养基进行优化。优化后培养基成分(g/L)是:桔皮粉42.5,葡萄糖5.0,蛋白胨28.5,(NH_4)_2SO_415.0,Na_2HPO_4·12H_2O 1.7,KH_2PO_41.4,Zn SO_4·7H_2O 0.5。优化培养基后果胶酶活力达92.1 U/m L,比优化前提高了36.2%。; 陈勇强叶秀云梁燕辉徐凡李亮林娟; 关键词：黑曲霉果胶酶复合诱变产酶条件响应面法

产甘露聚糖酶海洋微生物的筛选及酶学性质研究被引量：11: 2015年; 目的：筛选产甘露聚糖酶的海洋微生物。方法：采用2216E、海水-高氏一号和海水-PDA培养基对采集的微生物进行分离纯化,采用平板透明圈法对菌株进行初筛,并对初筛中HC值较大的菌株通过发酵测酶活复筛;采用16S r DNA序列分析,并结合细胞和菌落形态观察及部分生理生化试验,对菌株进行鉴定;利用硫酸铵盐析法制备粗酶液,研究甘露聚糖酶作用的酶学特性。结果：从台湾海峡采集的海水和海泥样品中,分离得到细菌467株,霉菌145株,放线菌10株,初筛得到64株有透明圈的菌株,复筛得到菌株B555,其酶活力最高为28.18 U/m L,经鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株B555所产甘露聚糖酶的最适反应p H为7.0,且在p H 5.0~10.0时较稳定;最适反应温度为50~55℃,在55℃时半衰期约为150 min;1 mmol/L的金属离子Ni＋、Co2＋、Zn2＋、Mg2＋、Ca2＋、Na＋、K＋、Fe3＋、Ba2对酶活力均有抑制作用。在55℃,p H 7.0条件下,该酶对槐豆胶和魔芋粉有很好的底物特异性,Km值分别为4.7和3.33 mg/m L,Vmax值分别为588.23和476.19μmol/（m L·min）。可应用于魔芋甘露低聚糖的酶法制备。; 李云程林娟梁燕辉叶秀云朱凡; 关键词：甘露聚糖酶海洋微生物酶学性质

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究被引量：13: 2016年; 【目的】从不同来源的样品中筛选产木聚糖酶的菌株,并对其进行菌种鉴定和酶学性质研究。【方法】以自制木聚糖为唯一碳源,采用平板透明圈方法筛选产木聚糖酶的菌株,结合菌株的形态特征和16S r DNA序列分析鉴定菌种,并对菌株所产木聚糖酶进行酶学性质研究。【结果】筛选到的44株有透明圈的菌株中27株具有产木聚糖酶能力,其中B659菌株产酶能力最高;经鉴定B659菌株为同温层芽孢杆菌;B659菌株所产木聚糖酶的最适反应温度55℃,最适反应p H值6.5,在37℃、p H 8~10的条件下保温2 h,仍具有78%以上的酶活力以及较好的耐碱性。10 mmol/L K+和1mmol/L Fe^(2+)对该酶具有促进作用,Mn^(2+)、Cu^(2+)和Co^(2+)对该酶具有明显的抑制作用。【结论】筛选到具有较好耐碱性的木聚糖酶高产菌株——同温层芽孢杆菌B659。; 林小洪叶秀云王国增梁燕辉徐凡林娟; 关键词：木聚糖酶酶学性质

高产几丁质酶菌株的诱变选育及发酵条件的优化被引量：6: 2018年; 以粘质沙雷氏菌G3-1为出发菌株,通过紫外-Li Cl和微波-Li Cl两轮复合诱变,得到一株产酶能力高且遗传稳定的突变株GF-21,通过单因素实验和正交实验对突变株GF-21的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最优发酵培养基成分为:乳糖6 g/L,尿素10 g/L,KCl 1.0 mmol/L,Na Cl 5 g/L,胶体几丁质10 g/L,此时,几丁质酶活力为4.73 U/m L,比优化前提高了109.3%,较出发菌株提高了470%;最优发酵条件为:培养基初始p H9.0,温度30℃,摇床转速220 r/min,接种龄5 h,接种量10%。本文为几丁质酶的生产应用奠定了良好的基础。; 郑家敏梁燕辉朱凡叶秀云林娟; 关键词：几丁质酶诱变培养基优化发酵条件优化

几丁质酶基因的克隆表达及酶学性质被引量：9: 2018年; 【背景】几丁质是自然界中储藏量仅次于纤维素的有机物,几丁质酶能降解几丁质生成几丁寡糖,实现废弃物的高值化利用,目前菌株产几丁质酶能力低限制了它的生产应用。【目的】克隆弧菌(Vibrio sp.)GR52的几丁质酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,对分离纯化的重组几丁质酶进行酶学性质研究。【方法】以弧菌GR52菌株基因组DNA为模板,克隆得到几丁质酶基因GR52-1,构建重组基因工程菌BL21(DE3)/p ET22b-chi GR52-1,诱导表达的产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究。【结果】重组酶的最适反应pH为6.0,在pH5.0-10.0范围内37°C保温1 h仍能保持85%以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性;最适反应温度为50°C,在45°C保温1 h其酶活力基本没有损失,在50°C保温1 h其残余酶活力仍达60%;在1 mmol/L浓度下,Cu^(2+)、Ca2+对该酶具有促进作用,Hg+对该酶具有明显的抑制作用;在5 mmol/L浓度下,Ni+对该酶具有一定的促进作用,Mn^(2+)、Co^(2+)、Li^+、Fe^(2+)、Hg^+、SDS(十二烷基硫酸钠)对该酶具有明显的抑制作用。以胶体几丁质为底物时,动力学参数Km、Vmax、kcat分别为0.85 mg/m L、0.19μmol/(m L·min)和7.02 s-1。底物特异性分析表明该重组酶能特异性降解几丁质。【结论】重组几丁质酶具有良好的酶学性质,为几丁质酶的开发应用奠定基础。; 郑家敏梁燕辉朱凡叶秀云林娟; 关键词：几丁质酶弧菌克隆表达酶学性质

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梁燕辉

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