侯锡苗
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 嗜热菌PIF1解旋酶的生化活性研究被引量：2
- 2021年
- 小整合频率1(petite integration frequency 1,PIF1)解旋酶广泛存在于生物体内,在核酸的代谢过程中发挥着重要作用。近年来,人们已经报道了多种PIF1解旋酶的生化活性及三维结构,但对极端环境下细菌的PIF1解旋酶的报道仍较少。本文利用多种生物化学与生物物理学技术,对黄石热脱硫弧菌PIF1(Ty.PIF1)解旋酶进行了多方面研究。通过原核表达纯化系统,获得了纯度90%以上,均一性好的Ty.PIF1蛋白。Ty.PIF1在溶液中为单体,分子量约为60 kD。Ty.PIF1具有很高的热稳定性,在65℃以下时,二级结构保持稳定,大于70℃时,二级结构才会发生改变。Ty.PIF1在体外最适解旋温度为45℃,并非黄石热脱硫弧菌生存的最适温度,预示着Ty.PIF1在体内发挥活性时,可能需要其他辅助因子的参与。Ty.PIF1的酶活力温度范围较宽,在20~55℃均具有解旋活性,在55℃能解旋预示了Ty.PIF1具有耐热特性。Ty.PIF1偏向于同含有单链的底物结合,但对单链长度有一定要求,其长度至少大于4 nt;Ty.PIF1也会较好地结合无单链尾链的G4结构,说明Ty.PIF1可能有专门结合G4结构的区域。Ty.PIF1能解开一系列带有5′-单链尾链的类似于复制中间体的底物,且对底物结构有一定的偏好性;Ty.PIF1也可以解开含有G4结构的底物,DNA-RNA杂交链、RNA-loop结构,预示着Ty.PIF1在生物体内有着多种生物学功能。Ty.PIF1解旋带有不同长度5′-单链尾链的双链底物时,尾链长度越长,解旋速率越快,预示着Ty.PIF1可能与Sc.PIF1一样有着较低的解旋持续性。本文将Ty.PIF1的生化活性与其它物种的PIF1解旋酶进行了比较,找出了其中的共性与差异,加深了人们对嗜热菌PIF1解旋酶的认识,为今后研究其它极端环境微生物的PIF1解旋酶提供了一些思路。
- 李丹李海红戴阳雪刘娜女侯锡苗奚绪光
- 关键词：结合活性
- 单分子技术的i基序DNA动态结构实验研究
- 2023年
- 为探索i基序(i-motif)DNA结构的折叠过程,利用单分子荧光共振能量转移技术,对基因序列bcl2在不同pH值(6.2~8.0)条件下进行动态检测。结果表明:当pH=6.2时,bcl2序列的荧光传递效率分布在0.95处为单峰,即i-motif结构处于均匀、完全的折叠状态;随着pH值增加至8.0,荧光传递效率分布逐步向左移动,效率峰最终停留在0.40处,即i-motif结构在高pH值条件下的部分去折叠过程。荧光能量转移效率动态分布曲线拟合出6个峰,即i-motif结构具有6个折叠状态。证明了当pH值发生改变时,i-motif可以在多种折叠状态间进行自发地变构与转换,为进一步研究i-motif的生理功能提供参考。
- 顾江新侯锡苗
- 关键词：生物大分子
- 蛋白质晶体虚拟仿真实验的建设及应用
- 2023年
- 蛋白质分子三维结构建模是生命科学的研究前沿,其实验基础是高质量蛋白质晶体制备及晶体衍射。对本科生开展蛋白质晶体实验教学面临建设成本高、存在安全隐患和持续时间长等实际困难,亟须建设虚拟仿真实验平台。虚拟仿真实验基于自有科研成果,设置蛋白质结晶条件初筛、结晶条件优化、晶体衍射和结构解析等模块,具有高度可行性、真实性和系统性。在实验过程中,引导和鼓励学生深入分析并自主解决遇到的科学问题,掌握蛋白质晶体研究的基本思路。已取得良好的教学效果,对相关专业的实验教学有一定的示范作用。
- 顾江新侯锡苗
- 关键词：蛋白质晶体实验教学
- 易通过冷冻食品传播的新冠病毒解旋酶的表达纯化及酶活研究被引量：3
- 2021年
- 通过原核表达方式纯化得到新冠病毒解旋酶(SARS-CoV-2-Nsp13),并利用荧光各向异性和凝胶阻滞试验探究了其体外结合DNA、RNA底物的亲和力及解旋双链DNA的最佳解旋条件。结果表明,SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶具有结合单链DNA(ssDNA)、带有5'尾链的双链DNA(5'Oh-dsDNA)及RNA发卡结构(RNA-HP)的活力,亲和性依次为5'Oh-dsDNA≈RNA-HP>ssDNA,结合曲线呈S型。SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶与DNA、RNA底物的结合具有协同性。SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶可以解旋带有5'尾链的双链DNA,解旋的方向为5'-3',发挥完全解旋活性的酶浓度为3μmol/L;而该解旋酶解旋DNA双链的活性相对较弱,解旋活性在NaCl浓度达到80 mmol/L时受到明显的抑制。研究结论可为深入理解冠状病毒解旋酶的生化活性及工作机理提供参考和帮助。
- 李海红郑亚婷高博韩晓睿何怡宁侯锡苗
- 关键词：冠状病毒蛋白表达纯化DNA结合活性
- 实时荧光定量PCR技术及其在几类病原体检测中的应用被引量：7
- 2015年
- 实时荧光定量PCR是传统PCR技术与光谱技术相结合而发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、重复性好和PCR污染少等优点。作者对实时荧光定量PCR技术的原理、影响因素以及在临床病原体的快速检测和诊断应用方面进行了综述。
- 李海红侯锡苗
- 关键词：实时荧光定量PCR影响因素病原体
