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李海红

作品数：5 被引量：13H指数：2
供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇农业科学

主题

  • 3篇解旋酶
  • 2篇嗜热
  • 2篇嗜热菌
  • 2篇结合活性
  • 2篇解旋
  • 2篇活性
  • 2篇表达纯化
  • 1篇蛋白表达纯化
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇影响因素
  • 1篇原体
  • 1篇生化
  • 1篇生物学
  • 1篇实时荧光
  • 1篇实时荧光定量
  • 1篇实时荧光定量...
  • 1篇实时荧光定量...
  • 1篇实验室
  • 1篇实验室管理

机构

  • 5篇西北农林科技...

作者

  • 5篇李海红
  • 3篇奚绪光
  • 3篇侯锡苗
  • 2篇刘娜女
  • 1篇李丹
  • 1篇赵正阳
  • 1篇范三红

传媒

  • 1篇职业与健康
  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇农产品加工

年份

  • 2篇2021
  • 1篇2016
  • 1篇2015
  • 1篇2014
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
一种嗜热菌Pif1解旋酶的表达纯化及活性分析被引量：1
2016年
【目的】利用大肠杆菌表达纯化嗜热脱铁去硫弧菌(Deferribacter desulfuricans)解旋酶DePif1,并对其结合与解旋DNA的活性进行分析,为Pif1家族解旋酶结构和功能的阐明奠定基础。【方法】将促溶标签SUMO编码序列和人工合成的DePif1解旋酶编码序列依次连入pET15b载体,获得重组融合表达载体pET15b-SUMO-DePif1,然后将其导入E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达;利用Ni-NTA亲和层析柱获得融合蛋白,SUMO蛋白酶酶切去除融合标签,再经Heparin和Ni-NTA柱分离获得无标签的纯化重组DePif1蛋白;采用荧光各向异性分析,研究pH和NaCl浓度对DePif1与DNA结合的影响及DePif1与不同底物(单链DNA、双链DNA和G4-DNA)的结合特性;使用基于荧光共振能量转移的stopped-flow技术,分析DePif1对不同底物(G4-DNA with 5′26nt tail和dsDNA with 5′26nt tail)的解旋活性。【结果】每升菌液可获得9 mg纯度大于95%的DePif1解旋酶。DePif1结合不同DNA底物的强度依次为G4-DNA>单链DNA>双链DNA,其对G4-DNA的解旋活力大于双链DNA。【结论】成功表达并纯化了嗜热脱铁去硫弧菌Pif1解旋酶,并证明其具有特异的G4-DNA结合和解旋能力。
赵正阳刘娜女李海红奚绪光范三红
关键词：表达纯化
嗜热菌PIF1解旋酶的生化活性研究被引量：2
2021年
小整合频率1(petite integration frequency 1,PIF1)解旋酶广泛存在于生物体内,在核酸的代谢过程中发挥着重要作用。近年来,人们已经报道了多种PIF1解旋酶的生化活性及三维结构,但对极端环境下细菌的PIF1解旋酶的报道仍较少。本文利用多种生物化学与生物物理学技术,对黄石热脱硫弧菌PIF1(Ty.PIF1)解旋酶进行了多方面研究。通过原核表达纯化系统,获得了纯度90%以上,均一性好的Ty.PIF1蛋白。Ty.PIF1在溶液中为单体,分子量约为60 kD。Ty.PIF1具有很高的热稳定性,在65℃以下时,二级结构保持稳定,大于70℃时,二级结构才会发生改变。Ty.PIF1在体外最适解旋温度为45℃,并非黄石热脱硫弧菌生存的最适温度,预示着Ty.PIF1在体内发挥活性时,可能需要其他辅助因子的参与。Ty.PIF1的酶活力温度范围较宽,在20~55℃均具有解旋活性,在55℃能解旋预示了Ty.PIF1具有耐热特性。Ty.PIF1偏向于同含有单链的底物结合,但对单链长度有一定要求,其长度至少大于4 nt;Ty.PIF1也会较好地结合无单链尾链的G4结构,说明Ty.PIF1可能有专门结合G4结构的区域。Ty.PIF1能解开一系列带有5′-单链尾链的类似于复制中间体的底物,且对底物结构有一定的偏好性;Ty.PIF1也可以解开含有G4结构的底物,DNA-RNA杂交链、RNA-loop结构,预示着Ty.PIF1在生物体内有着多种生物学功能。Ty.PIF1解旋带有不同长度5′-单链尾链的双链底物时,尾链长度越长,解旋速率越快,预示着Ty.PIF1可能与Sc.PIF1一样有着较低的解旋持续性。本文将Ty.PIF1的生化活性与其它物种的PIF1解旋酶进行了比较,找出了其中的共性与差异,加深了人们对嗜热菌PIF1解旋酶的认识,为今后研究其它极端环境微生物的PIF1解旋酶提供了一些思路。
李丹李海红戴阳雪刘娜女侯锡苗奚绪光
关键词：结合活性
高校结构生物学实验室的管理问题探析
2014年
结合所在单位结构生物学实验室管理过程中的实际情况,探讨了高校结构生物学类实验室的管理问题:从制定实验室试剂、仪器设备和数据管理的制度和细则,到实验室管理人员能力的培养和提升,提出了切实可行的对策和建议,对于同类实验室的建设和管理具有一定的参考价值。
李海红奚绪光
关键词：结构生物学实验室管理
易通过冷冻食品传播的新冠病毒解旋酶的表达纯化及酶活研究被引量：3
2021年
通过原核表达方式纯化得到新冠病毒解旋酶(SARS-CoV-2-Nsp13),并利用荧光各向异性和凝胶阻滞试验探究了其体外结合DNA、RNA底物的亲和力及解旋双链DNA的最佳解旋条件。结果表明,SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶具有结合单链DNA(ssDNA)、带有5'尾链的双链DNA(5'Oh-dsDNA)及RNA发卡结构(RNA-HP)的活力,亲和性依次为5'Oh-dsDNA≈RNA-HP>ssDNA,结合曲线呈S型。SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶与DNA、RNA底物的结合具有协同性。SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶可以解旋带有5'尾链的双链DNA,解旋的方向为5'-3',发挥完全解旋活性的酶浓度为3μmol/L;而该解旋酶解旋DNA双链的活性相对较弱,解旋活性在NaCl浓度达到80 mmol/L时受到明显的抑制。研究结论可为深入理解冠状病毒解旋酶的生化活性及工作机理提供参考和帮助。
李海红郑亚婷高博韩晓睿何怡宁侯锡苗
关键词：冠状病毒蛋白表达纯化DNA结合活性
实时荧光定量PCR技术及其在几类病原体检测中的应用被引量：7
2015年
实时荧光定量PCR是传统PCR技术与光谱技术相结合而发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、重复性好和PCR污染少等优点。作者对实时荧光定量PCR技术的原理、影响因素以及在临床病原体的快速检测和诊断应用方面进行了综述。
李海红侯锡苗
关键词：实时荧光定量PCR影响因素病原体
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