任龙辉
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 落葵皱缩花叶病毒CP基因的原核表达及多克隆抗血清的制备
- 2017年
- 以感病紫茉莉叶片为材料,采用RT-PCR方法克隆落葵皱缩花叶病毒(Basella rugose mosaic virus,Ba RMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并构建p ET30a-Ba RMV-cp原核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌[Rosetta(DE3)Plys S],成功诱导表达得到大小约为40.0 k D的与预期大小相符的融合蛋白(His-CP)。SDS-PAGE电泳完毕后用0.25 mol·L^(-1)的KCl溶液染色,将目的蛋白切胶纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测该抗体的效价为1︰16 000,Western-blotting分析表明该抗体具有很强的特异性。对野外感病紫茉莉和实验室内接种发病本氏烟检测结果也表明,所制备的抗体具有良好的特异性,可用于大规模样品检测。
- 李小琴张鹏远任龙辉任龙辉王建光代瑾然
- 关键词：紫茉莉CP基因蛋白质印迹法
- 薯蓣褪绿坏死花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清的制备被引量：2
- 2015年
- 薯蓣褪绿坏死花叶病毒(yam chlorotic necrotic mosaic virus,YCNMV)是马铃薯Y病毒科柘橙病毒属暂定成员。采用RT-PCR方法,以Sprimer/M4简并引物对扩增获得的YCNMV分离物3'端基因组序列为参考序列,根据该序列设计CP基因特异引物获得YCNMV CP基因并插入p ET-30a表达载体中,在BL21(DE3)菌株中诱导表达。获得的融合蛋白经Ni+-NTA柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果表明,连接在表达载体中的CP基因序列及表达的蛋白氨基酸序列与预期的CP基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99.65%。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,获得的融合蛋白大小约为44 k D,与预期蛋白大小相符。制备的抗血清经Western blotting和ID-ELISA检测表明,获得的多克隆抗体效价较高,能可靠、灵敏、特异地与YCNMV病毒颗粒结合,可应用到该病毒的检测中。
- 张鹏远任龙辉王建光陈壮壮钟宇陈穗云
- 关键词：外壳蛋白原核表达抗血清
