付宇
- 作品数：3 被引量：25H指数：2
- 供职机构：东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 荧光定量PCR方法快速检测原料乳中的大肠杆菌被引量：20
- 2009年
- 利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术建立一种快速检测原料乳中大肠杆菌数量的方法。根据大肠杆菌的ITS保守序列设计特异性引物,应用常规PCR方法确定引物特异性,然后优化SYBR GreenⅠ的添加量和Mg2+的额外添加量,确定对原料乳中大肠杆菌的最低检测限。结果表明,引物具有很强的特异性,最终确定的SYBR GreenⅠ(20×)的添加量为0.75μL,Mg2+的额外添加量为0.875mmol/L;在不增菌的前提下,对原料乳中大肠杆菌的最低检测限为1.7×103mL-1。检测的10份样品中有四份样品的大肠杆菌数超过103mL-1,与平板菌落计数结果无显著差异。该方法特异性强,灵敏度高,操作简便快捷,整个检测过程仅需3h,具有较大的推广及应用价值。
- 周微张伟钦付宇贡汉生孟祥晨
- 关键词：大肠杆菌原料乳荧光定量PCR
- Taqman荧光实时PCR快速检测原料乳中EPEC被引量：2
- 2009年
- 建立可对原料乳中肠致病性大肠埃希氏菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)进行快速检测的Taqman荧光实时PCR方法。以eae致病基因为靶基因,用特异性引物和Taqman探针进行实时PCR扩增,研究反应的特异性和检测限,并用所建立的方法对16份市售原料乳进行EPEC检测。结果表明,所用引物和探针可高效扩增出目的片段,与原料乳中其他常见致病菌无交叉反应,经2h增菌后检测限为8.8mL-1。对16份市售原料乳样品,检出2份含有EPEC,血清型分别为O111:K58(B4)和O127a:K63(B18)。全部检测过程只需5h,可用于原料乳中EPEC的快速检测和污染调查。
- 张伟钦付宇周微贡汉生孟祥晨
- 关键词：TAQMAN原料乳
- 黑龙江省部分地区原料奶中致泻性大肠杆菌的调查被引量：3
- 2009年
- 目的:通过调研黑龙江省部分重要的奶源地区春、夏季的原料奶,确定该地区原料奶中致泻性大肠杆菌的主要类型和相关毒力基因的存在情况。方法:在哈尔滨、绥化和大庆地区的27个奶牛场和奶牛养殖户采集原料奶,通用生化试验和血清学试验,分离鉴定原料奶中的致泻性大肠杆菌并确定相应的血清型。采用多重PCR方法分别检测EPEC和ETEC中eaeA与bfpA以及stⅠ与ltⅠ毒力基因的存在情况。结果:从81份原料奶样品中分离、鉴定出致泻性大肠杆菌21株(检出率22.22%),其中EPEC8株、ETEC10株和EIEC3株。经多重PCR检测8株EPEC和10株ETEC,确定它们分别含有eaeA与bfpA以及stⅠ与ltⅠ毒力基因。结论:黑龙江省部分重要奶源地区的原料奶均不同程度地被污染了致泻性大肠杆菌,尤以ETEC和EPEC两种类型居多;分离出的ETEC和EPEC分别含有stⅠ与ltⅠ以及eaeA与bfpA毒力基因。
- 付宇姜博贡汉生孟祥晨
- 关键词：原料奶致泻性大肠杆菌毒力基因PCR
