罗伟芝
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：深圳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定被引量：3
- 2012年
- 通过NCBI查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的mRNA,根据其CDS区域设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化到E.coliBL21(DE3)和E.coli Rosatta后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化.采用免疫印迹检测其与对虾过敏患者血清的IgE结合活性.对罗氏沼虾变应原进行了表达、鉴定及纯化,成功地获得了具有变应原活性的重组罗氏沼虾原肌球蛋白,为罗氏沼虾过敏性疾病的诊断、治疗奠定了基础.
- 罗伟芝符春荣邬玉兰陈献雄刘志刚黄海珍
- 关键词：罗氏沼虾原肌球蛋白变应原
- 猪蛔虫抗菌肽Cecropin p基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 从猪蛔虫提取总RNA,反转录成cDNA后分别设计引物对Cecropin 2、Cecropin 3和Cecropin 4基因进行PCR扩增,分别得到带有双酶切位点的目的基因片段.将目的基因片段与PMD18 T载体连接,转化Top10克隆菌,测序正确后克隆入pET28a表达载体,进行双酶切和测序鉴定.研究结果表明,克隆得到的Cecropin p2、Cecropin p3和Cecropin p4基因均由225个碱基组成,一个编码由74个氨基酸残基组成的开放阅读框,其蛋白相对分子质量约为8 kD,等电点分别为9.86、10.16和9.16.同源性分析结果显示:克隆所得猪蛔虫Cecropin p2、Cecropin p3和Cecropin p4与数据库NCBI中的猪蛔虫Cecropin p2、Cecropin p3和Cecropin p4基因同源性均为100%,与其它Cecropin p基因同源性也较高(>42%).分子进化树显示,Cecropinp4的分化出现最早,其次为Cecropin p2,Cecropin p1和Cecropin p3分化得最晚.成功克隆了猪蛔虫Cecropin 2、Cecropin 3和Cecropin 4基因,构建了它们的原核表达载体并进行了生物信息学分析,为其重组表达和抑菌活性鉴定等研究奠定了理论基础.
- 高安键赵若聪罗伟芝魏鹏飞刘志刚
- 关键词：猪蛔虫
