王纪东
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项天津市科委资助项目国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 切刻内切酶介导恒温扩增技术条件优化被引量：3
- 2012年
- 目的采用切刻内切酶介导恒温扩增技术(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)扩增蜡样芽孢杆菌质粒,考察缓冲体系、温度、离子浓度等条件对扩增效率的影响。方法通过独特的引物设计,采用NEMA技术扩增蜡样芽孢杆菌质粒,通过系列实验优化了缓冲体系、温度和离子浓度等条件,采用琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果。结果通过设计不同长度片段的扩增产物,证明采用NEMA技术进行恒温扩增引物设计的正确性。扩增反应中,缓冲体系的组成、扩增温度、体系镁离子及二甲基亚砜(DMSO)的浓度会影响切刻内切酶恒温扩增效率,而海藻糖添加与否在本实验中与扩增效率无关。在最优条件下,NEMA恒温扩增方法对于蜡样芽孢杆菌质粒的灵敏度达到1.7 pmol/L。结论 NEMA可以用来进行较长片段的扩增,有望成为一种常规的恒温扩增技术,应用到战时或者应急条件下的快速核酸诊断中。
- 王纪东王小慧李媛张娟琨詹林盛
- 关键词：NEMA核酸扩增技术
- 多孔硅适配子生物传感器的电化学研究被引量：1
- 2011年
- 构建1种用于快速检测四环素的新型电化学纳米多孔硅（PS）生物传感器。通过脉冲腐蚀法制得多孔硅基片,将适配子固定于其上,这种四环素适配子能够特异性识别四环素分子,并引起阻抗值的变化。利用电化学交流阻抗法比较固定适配子前后硅片表面阻抗值的变化,以及在体系中加入不同浓度四环素后阻抗谱的变化。选择1个合适的等效电路对测得的阻抗数据进行拟合,获得了四环素浓度与阻抗值的变化规律。传感器的线性检测范围为2.079~62.37 nmol/L,检测限为2.079 7 nmol/L。
- 张彬彬张娟琨曾志鹏李成学刘珺王纪东
- 关键词：适配子阻抗四环素
- 树鼩水动力转染方法的建立及在HBV模型探索中的应用被引量：8
- 2011年
- 目的建立一种水动力注射将外源基因导入树鼩肝脏的方法,并用此方法建立HBV树鼩模型。方法用萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-Gal)作为报告基因,通过树鼩大隐静脉将报告基因用水动力注射方法导入树鼩肝脏,活体成像和β-Gal染色观察水动力转染效果。将pHBV1.2质粒用水动力注射方法转入树鼩肝脏,检测树鼩血清中ALT、实时荧光定量检测血清中HBV DNA,ELISA检测血清中HBsAg、HBsAb。结果通过大隐静脉水动力注射,报告基因能够在肝脏特异性表达,转染HBV1.2质粒后树鼩血清中能够检测到相关阳性指标。结论大隐静脉水动力注射法能够作为树鼩肝脏外源基因导入的一种方法,并用此方法初步探索了树鼩的HBV模型。
- 周勇阎少多闫虎段相国王纪东章金刚詹林盛
- 关键词：树鼩动物模型
