王平
- 作品数：16 被引量：62H指数：5
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- 中药复方抑瘤饮影响荷S180瘤小鼠免疫功能的动态研究被引量：10
- 2006年
- 研究荷S180瘤小鼠灌服中药复方抑瘤饮(简称抑瘤饮)不同时间点脾细胞免疫功能的动态变化,揭示其体内抗瘤的免疫机制。于BALB/c小鼠右腋皮下接种S180细胞,24 h后,抑瘤饮组开始每日灌服抑瘤饮,对照组灌服等量凉开水。分别于灌服第0、10、20、30、40天处死动物,称取体重和瘤重;无菌获取脾细胞,MTT法检测NK细胞杀伤活性、ConA诱导转化及IL-2诱生活性,流式细胞仪检测CD4+细胞和CD8+细胞百分率。结果显示,抑瘤饮对小鼠体内S180移植肿瘤的生长,有明显的渐增性抑制作用;抑瘤饮能够明显逆转S180移植肿瘤对小鼠脾细胞的NK细胞杀伤率、转化指数、IL-2诱生活性、CD4+细胞和CD8+细胞百分率的抑制作用,且逆转作用呈时间依赖性增强。表明抑瘤饮体内能够渐增地上调被S180移植肿瘤抑制的免疫功能,从而发挥抗瘤作用。
- 杨志强王润田崔澂王平丁军颖邓郁青张征峥韩志鹏李铁民杨丽娟
- 关键词：抑瘤饮S180荷瘤小鼠肿瘤免疫
- 抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性。方法分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗)。纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶。分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA。结果获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50μg/L的gp36。结论为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗。
- 赵正历王润田王平王从印张征峥邓郁青
- 关键词：HIV-2抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- As_2O_3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的体外研究被引量：7
- 2006年
- 目的体外研究As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的作用。方法获取体外经As2O3作用后再培养的Colon26培养上清,以不经As2O3作用的Colon26同步培养上清作对照,定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-105种免疫抑制分子的含量,实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达5项免疫功能指标的影响。结果不经As2O3作用同步培养的Colon26上清,5种免疫抑制分子均可被测到,以TGF-β1含量最高;该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标,均有显著抑制作用。As2O3作用后的Colon26,其第一次再培养上清,5种免疫抑制分子含量及对除CD3ε-ζ+表达外的其余4项免疫功能指标的抑制,均明显降低;与第一次再培养上清相比,其第二次再培养上清,TGF-β1、VEGF和IL-4含量及对NK杀伤、Con A诱导转化和CD3ε+ζ+表达的抑制,均明显提高,其余无明显变化。相关分析显示,TGF-β1和IL-10与抑制Con A诱导转化及IL-2Rα表达正相关;IL-4与抑制Con A诱导转化、NK杀伤及CD3ε+ζ+表达正相关;VEGF和IL-6与5项免疫功能指标的抑制不相关。结论As2O3可明显下调Co-lon26肿瘤细胞免疫抑制分子的分泌,下调TGF-β1、VEGF和IL-4分泌的作用可持续48h,下调IL-6和IL-10分泌的作用可持续96h,可能是As2O3抗瘤效应机制之一。
- 崔澂王润田佟慧王智华丁军颖王平
- 关键词：AS2O3下调免疫抑制分子
- 小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒构建及其肿瘤基因治疗初探被引量：2
- 2004年
- 目的 构建小鼠IL 12单链融合基因 (msIL 12 ) ,进行基因治疗初探。方法 用RT PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p4 0cDNA和p35cDNA ,2次PCR引入linker后 ,依次克隆入pcDNA3质粒 ,构建成msIL 12真核表达质粒 (pmsIL 12 ) ;用DEAE dextran法将PEG纯化的pmsIL 12转染COS 7细胞 ,用ELISA法检测其培养上清 (转染上清 )IL 12蛋白含量。皮内注射PEG纯化的pmsIL 12 ,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响 ,观察其对荷H2 2腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响。结果 所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86 6 72完全一致 ;所得IL 12p4 0cDNA序列与GenBank登录号AH0 0 4 85 9报道完全相同 ,除第 10 0 0位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同 ,都是丝氨酸 )外也与GenBank登录号M86 6 71报道相同。成功构建了小鼠IL 12单链融合基因真核表达质粒pmsIL 12 ,其转染COS 7细胞后的转染上清IL 12蛋白含量达 (2 .5 5± 0 .6 0 )ng ml。皮内注射pmsIL 12后 ,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强 (P <0 .0 1) ,使荷H2 2肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P <0 .0 5 )。结论 构建了小鼠IL 12单链融合基因的真核表达质粒 ,可用于基因治疗研究。
- 王丽王润田王平姜少灏张红中佟慧李全海杨丽娟王蕙芬
- 关键词：白细胞介素-12真核表达质粒基因治疗小鼠抗原提呈细胞
- 中药复方抑瘤饮对小鼠S180移植瘤血管生成的动态研究被引量：6
- 2009年
- 目的:研究荷S180瘤小鼠灌服中药复方抑瘤饮不同时间点肿瘤内血管生成的动态变化,揭示抑瘤饮体内抗瘤的作用机制。方法:56只BALB/c小鼠随机分为抑瘤饮组和对照组(n=28),每组分为4个亚组(每亚组7只)。右腋皮下接种S180肿瘤细胞24 h后,抑瘤饮组小鼠灌服抑瘤饮,对照组小鼠灌服等量凉开水,每日2次,每次0.5 mL;2组分别于灌服第10,20,30,40天点各处死一亚组小鼠。分离肿瘤制成石蜡包埋切片,免疫组化法检测肿瘤组织内血管生成(CD34染色)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)和内皮抑素(ES)的动态变化,结果以阳性酶点(positive enzyme dot,PED)表示。结果:抑瘤饮能显著降低肿瘤组织内微血管生成:抑瘤饮组CD34在第10,20,30,40天点PED均低于对照组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01和P<0.01)。抑制VEGF和VEGFR-2的表达:抑瘤饮组VEGF在第10,20,30,40天点PED均低于对照组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01和P<0.01):抑瘤饮组VEGFR-2在相应时间点均低于对照组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。促进ES的表达:抑瘤饮组ES在相应时间点与对照组比第10天点PED无明显差异,在第20,30,40天点PED均高于对照组(分别P<0.05,P<0.05和P<0.01)。结论:抑瘤饮体内可通过下调VEGF和VEGFR-2表达,上调ES表达,抑制肿瘤组织内血管生成发挥抗瘤作用。
- 韩志鹏王润田李铁民杨志强崔潋丁军颖张征峥邓郁青王平
- 关键词：抑瘤饮肿瘤血管生成CD34血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2内皮抑素
- 抑瘤饮增加小鼠S180移植瘤巨噬细胞浸润及TNF-α和iNOS表达被引量：5
- 2008年
- 目的动态研究中药复方抑瘤饮对小鼠S180移植瘤内巨噬细胞(Mφ)浸润及TNF-α和iNOS表达的影响,揭示其体内抗瘤免疫机制。方法Balb/c小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞,24h后,抑瘤饮组小鼠每日灌服抑瘤饮,对照组小鼠每日灌服等量凉开水。分别于第10、20、30天和第40天杀鼠取瘤制成切片,免疫组化染色法检测肿瘤组织内Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达,以图像分析系统对染色结果进行测定。结果所有4个时间点抑瘤饮组Mφ浸润均显著高于对照组;第10天时抑瘤饮组TNF-α和iNOS表达与对照组无差异,第20、30天和第40天时高于对照组。结论抑瘤饮体内抗瘤作用可能与增加肿瘤组织中Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达有关。
- 李铁民王润田韩志鹏杨志强崔丁军颖邓郁青王平张征峥
- 关键词：抑瘤饮S180巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶
- 不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响被引量：3
- 2005年
- 目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。
- 丁军颖王润田张征峥杨志强韩志鹏李铁民邓郁青王平
- 关键词：IL-15基因转染NCI-H446
- 三种IL-15基因转染NCI-H446细胞模型的建立与鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的构建并鉴定三种IL-15基因转染的人小细胞肺癌(NCI-H446)细胞模型。方法PCR法扩增得原型IL-15基因片段(FhIL-15)I、L-15成熟肽基因片段(FhIL-15mp)和IL-2信号肽基因片段(FhIL-2sp);利用重叠延伸基因拼接法将FhIL-15mp和FhIL-2sp拼接成改型IL-15基因片段(FhIL-2sp-hIL-15mp)。将三种IL-15基因片段(FhIL-15、FhIL-15mp和FhIL-2sp-hIL-15mp)分别插入真核表达载体pEGFP-N1构建成相应的重组质粒(PhIL-15、PhIL-15mp和PhIL-2sp-hIL-15mp),用脂质体法分别转染NCI-H446、G418筛选得三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞(C-hIL-15、C-hIL-15mp、C-hIL-2sp-hIL-15mp)。对所得的各基因片段和重组质粒,用琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;对所得的各转染细胞,用RT-PCR法检测hIL-15mRNA的表达,ELISA法检测hIL-15蛋白的分泌。结果琼脂糖凝胶电泳和测序证明,FhIL-15、FhIL-15mp、FhIL-2sp-hIL-15mp电泳条带位置和基因序列正确。三种转染细胞均有IL-15mRNA表达,但仅C-hIL-2sp-hIL-15mp可测到22pg/mL的IL-15蛋白分泌。初步应用表明,三种转染细胞确有不同的免疫生物学特性。结论正确构建了三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞模型,可在进一步研究IL-15基因与肿瘤细胞免疫生物学特性的关系及至机制中应用。
- 张征峥王润田王丽刘维华杨丽娟王平丁军颖
- 关键词：基因克隆基因转染
- 黄芪下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外研究
- 目的:选用培养上清确有免疫抑制作用的小鼠结直肠癌株Colon26肿瘤细胞,检测其经黄芪(AMB)作用后再培养的上清对免疫功能的影响和上清中免疫抑制分子的含量,从逆转肿瘤免疫抑制的角度揭示AMB的抗瘤免疫作用新机制。
- 崔激王润田王智华王平
- 关键词：肿瘤免疫抑制免疫抑制分子
- 文献传递
- 医学院校医学免疫学课程教学状况的调查分析被引量：5
- 2006年
- 为了进一步具有针对性地改进医学免疫学教学方法,提高教学效果,本研究针对学生学习兴趣、课程难度等系列问题进行了问卷调查.结果表明各层次学生均认为医学免疫学是一门较为难学的课程,教师在教学过程中应根据学生的不同水平因材施教,同时还需注重反复强化概念,加强师生互动,适量使用幻灯片.
- 胡洁杨丽娟王平邓郁青姚智燕
- 关键词：医学免疫学教学方法
