潘旭
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划四川省软科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究
- 2017年
- 目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。
- 李晴邹庆毛斌黄淑赖默温潘旭孙文翠陈谊金刘嘉馨马峰
- 关键词：红系细胞带3蛋白
- 透明质酸水凝胶三维培养促进人胚胎干细胞向红系细胞诱导分化被引量：1
- 2017年
- 目的探讨采用透明质酸材料的三维培养方法将人胚胎干细胞(h ESCs)来源造血干/祖细胞向红系细胞诱导分化的效果。方法将hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾基质细胞(AGM-S3)共培养(37℃、5%CO_2)12 d的细胞(1.0×10~6)分别种植进海藻酸钠水凝胶、胶原蛋白水凝胶、透明质酸水凝胶内,并以悬浮法培养h ESCs作对照。以流式细胞仪检测细胞表面抗原表达,比较不同材料建立的三维培养的优劣,优化红系诱导分化的三维培养体系。结果海藻酸钠组内细胞培养10 d的GPA^+细胞为2.3%,GPA^+CD36+细胞仅为0.9%而悬浮培养分别为15.8%和6.1%。胶原蛋白组内细胞培养10 d的GPA^+细胞为11.1%,GPA^+CD36+细胞为5.2%,而悬浮培养分别为35.7%和27.7%。透明质酸组内红系细胞GPA^+细胞量和比率分别为2.06×105个和19.6%,而悬浮培养的红系细胞GPA^+细胞量和比率分别为1.62×10~5个和15.7%,透明质酸组是悬浮培养的1.27倍,其中悬浮培养GPA^+CD36-为9.7%,而透明质酸水凝胶为GPA^+CD36-为13.1%。结论与悬浮培养相比,海藻酸钠水凝胶和胶原蛋白水凝胶未表现出明显的扩增红系细胞的效果。透明质酸凝胶建立的三维培养方法利于红系细胞生长,该培养方法诱导分化hESCs得到的红系细胞成熟度提高。
- 曾宪波毛斌赖默温潘旭孙文翠周琼秀马峰
- 关键词：人胚胎干细胞红系祖细胞分化
- 人胚胎干细胞向嗜酸性粒细胞高效定向诱导分化模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立从人胚胎干细胞向成熟嗜酸性粒细胞定向诱导分化的高效体外培养模型。方法采用人胚胎干细胞与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)基质细胞共培养的方法,进行早期造血干细胞诱导分化,将诱导分化的造血干细胞进行悬浮培养,在含有血清的培养基中,分阶段添加不同细胞因子组合进行成熟嗜酸性粒细胞的定向分化和增殖。结果获得从CD34+CD45+细胞扩增了约651倍,且纯度高达95%以上,CD88+Siglec-8+EPO+的成熟嗜酸性粒细胞。结论本研究建立了1种人胚胎干细胞高效定向分化为成熟嗜酸性粒细胞的模型,为进一步深入研究嗜酸性粒细胞的早期发育调控和相关疾病的发生机制奠定了基础。
- 潘旭杨文钰孙文翠毛斌郁金凤路旭琳黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波周家喜马峰
- 关键词：人胚胎干细胞嗜酸性粒细胞定向诱导分化
- P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生
- 2019年
- 目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。
- 常晶滕嘉雯孙文翠曾加辉张勇刚潘旭周涯赖默温边国慧周琼秀刘嘉馨陈波马峰
- 人脑类器官来源间充质干细胞促进脐带血造血干祖细胞向巨噬细胞分化和功能极化
- 2022年
- 本文探讨了人脑类器官来源神经源性间充质干细胞(neural mesenchymal stem cells,nMSCs)对脐带血来源CD34(umbilical cord blood CD34,UCB-CD34)细胞向各系分化的作用,尤其是对巨噬细胞(macrophage,Mφ)诱导分化和极化的影响。本文通过UCB-CD34细胞与H1-nMSCs或hi PSC-nMSCs贴壁共培养,无MSCs组作为对照(control),计数共培养组和对照组造血细胞集落数、对集落细胞进行MGG染色、流式检测Mφ相关表面分子、转录组测序检测共培养7 d后CD34细胞红系和髓系基因表达的差异。将nMSCs通过trans-well与UCB-CD34来源的Mφ(UCB-Mφ)共培养,经IL-4刺激后,流式检测Mφ表面分子CD206的表达情况,并用U-PLEX平台测定培养基上清中IL-10的浓度。相较于对照组,UCB-CD34细胞分别与H1-nMSCs、hi PSC-nMSCs共培养时可获得更多的造血细胞集落(P<0.05)以及更多的M集落(P<0.01);UCB-CD34细胞分别与H1-nMSCs、hi PSC-nMSCs共培养第7天,可产生更多GMP细胞,而CFU-E产量减少。UCB-CD34细胞分别与H1-nMSCs、hi PSC-nMSCs在Mφ诱导分化培养基或无细胞因子分化培养基中共培养21 d后,均可获得更高比例和数量的Mφ。共培养7 d后CD34细胞转录组测序显示,与H1-nMSCs、hi PSC-nMSCs共培养组高表达GMP相关基因:NAPSB、HCK、FCGR1A、MS4A6A、PRTN3等和Mφ相关基因CD14、CSF1R、TRIB1和APP等;与nMSCs共培养组的UCB-Mφ在IL-4刺激时,高表达CD206表面标记分子,且分泌更多IL-10,即向M2型极化。本研究初步证明,H1-nMSCs、hi PSC-nMSCs能较好地促进UCB-CD34向Mφ分化及向M2型极化。
- 蔡信平周涯张秀秀潘旭李晓红赖默温张勇刚马峰
- 关键词：脐带血造血干细胞间充质干细胞
- 胶原支架促进人类多能干细胞向红细胞的诱导分化被引量：2
- 2018年
- 目的建立人胚胎干细胞（hESCs）来源的造血干/组细胞向红细胞分化的体外3D培养方法。方法hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾区（AGM-S3）基质细胞共培养14 d后获得CD34^＋CD45^＋造血干/祖细胞,对获得的CD34^＋CD45^＋细胞扩增5 d后,以相同初始接种数量分别接种于胶原水凝胶、透明质酸水凝胶、Ⅰ型胶原蛋白构建的三维（3D）支架材料（简称胶原支架）中,在体外模拟骨髓微环境,做红细胞定向分化,以普通液体悬浮培养（简称液体培养）为对照,通过MGG染色、流式细胞术、免疫染色、qRT-PCR等手段分别对收获的细胞做形态学、红系特异性表面标志表达情况、红系细胞成熟程度以及红系细胞发育过程中相关基因的表达情况分析。结果红系定向分化14 d后,胶原支架中收获的总细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.50、1.19、1.33倍,GPA^＋CD71^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.55、1.25及1.48倍;GPA^＋CD36^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.65、1.07、1.36倍。结论利用Ⅰ型胶原蛋白构建的3D支架材料可模拟骨髓微环境,促进红细胞分化。
- 王敏潘旭毛斌赖默温滕嘉雯陈谊金周琼秀马峰
- 关键词：红细胞胶原支架
- 人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。
- 郁金凤孙文翠路旭琳边国慧潘旭毛斌黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波李玉佳陈利民周家喜马峰
- 关键词：巨噬细胞诱导分化
- 拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。
- 路旭琳郁金凤孙文翠毛斌邹庆潘旭赖默温周涯李晴曾宪波黄淑周琼秀周家喜马峰
- 关键词：红细胞
- 不同体外诱导分化来源巨噬细胞表型分子分析及极化功能比较被引量：1
- 2018年
- 目的探讨人多能干细胞（hPSC）、人脐血CD34＋造血干/祖细胞与人白血病细胞系THP-1这3种来源巨噬细胞表型分子及其不同极化状态下炎症细胞因子mRNA相对表达水平，确定这3种来源巨噬细胞的功能。方法选择上述3种来源巨噬细胞，包括hPSC与AGM-S3基质细胞共培养来源巨噬细胞、人脐血CD34＋造血干/祖细胞来源巨噬细胞、THP-1来源巨噬细胞为研究对象。对其研究内容包括：①形态观察，并且进行麦格-姬姆萨（MGG）复合染色分析，判断巨噬细胞是否成功获得。②采用流式细胞术对其表型分子进行检测。③在脂多糖、白细胞介素（IL）-4刺激下，通过荧光定量PCR方法检测不同刺激物作用下其各种炎症细胞因子mRNA的相对表达水平，确定3种来源巨噬细胞的极化功能。采用独立样本t检验比较3种来源巨噬细胞不同刺激物作用下各种炎症细胞因子mRNA的相对表达水平。结果①根据细胞形态学观察及MGG复合染色结果，3种来源巨噬细胞均成功获得。②流式细胞术检测结果显示，3种来源巨噬细胞均表达髓系相关表型分子CD45、人类白细胞抗原（HLA）-Ⅱ、CD36与CD11b。另外，THP-1来源巨噬细胞仅表达巨噬细胞相关分子CD64与CD11c，而hPSC与AGM-S3基质细胞共培养来源巨噬细胞与人脐血CD34＋造血干/祖细胞来源巨噬细胞，均高表达巨噬细胞相关表型分子CD14、CD64、CD11c、CD68、CD86、CD206。③荧光定量PCR结果显示，hPSC与AGM-S3共培养来源巨噬细胞在脂多糖刺激3 h时，炎症细胞因子IL-1β、-6、-12β与肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA的相对表达水平达到峰值，分别为（14.69±0.24）、（305.50±67.26）、（10.91±1.48）、（128.31±9.90），均分别高于IL-4刺激3 h时的（0.75±0.14）、（2.66±0.27）、（0.54±0.04）、（0.89±0.08），并且差异均有统计学意义（t＝85.630、7.798、12.128、22.295，P＝0.000、0.001、0.000
- 元力潘旭边国慧李玉佳陈利民马峰
- 关键词：巨噬细胞人胚胎干细胞
