张文超
- 作品数：13 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家生猪现代产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白磷酸化位点鉴定及其作用研究被引量：1
- 2017年
- 为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白磷酸化对于病毒复制和转录的影响,本研究利用Phos-tag和点突变技术实现了N蛋白磷酸化形式的分离并鉴定出磷酸化位点为第120位丝氨酸(Ser120)。通过反向遗传操作系统将N蛋白的磷酸化位点突变并拯救出病毒。空斑实验、IFA检测、病毒生长曲线结果显示,磷酸化位点突变对于病毒的感染性和N蛋白的核定位没有影响,但是病毒的复制能力减弱。进一步利用荧光定量RT-PCR方法检测突变病毒与亲本病毒在不同感染时间的基因组RNA和亚基因组RNA的转录水平,结果表明突变病毒的g RNA和长链sg RNAs转录水平明显低于亲本病毒,表明N蛋白Ser120磷酸化可能参与了病毒的转录调控过程。
- 刘欢姜一峰黄勤锋杨莘张文超虞凌雪高飞周艳君童光志
- 关键词：PRRSVN蛋白磷酸化转录调控
- 猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其抗原表位和应用
- 本发明公开了一种由保藏号为CCTCC NO：C2017257的杂交瘤细胞株分泌的猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体。本发明还公开了包含该单克隆抗体的检测猪Delta冠状病毒的试剂盒。本发明还公开了猪Delta冠状病毒N...
- 童光志周艳君李慧春张文超陈鹏飞李先斌虞凌雪姜一峰高飞李丽薇
- 文献传递
- 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：5
- 2019年
- 猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。
- 李慧春陈鹏飞李先斌丁思嘉王康张文超杨德强李林徐晶晶虞凌雪姜一峰高飞于海童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JX14T2毒株的分离与鉴定被引量：1
- 2016年
- 江西省某猪场育肥猪群出现高热、呼吸困难和死亡等症状,为确定疫病病原,本实验室从发病猪场随机采取20份病死猪血样和组织,用RT-PCR的方法进行病原检测.结果显示,19份临床样品呈现猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）阳性.随后对病死猪肺组织进行病毒分离,结果显示分离的第1代病毒感染后48 h即可出现典型的致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,对传至第5代的病毒进行RT-PCR检测和间接免疫荧光鉴定,结果证实我们分离获得的病毒为PRRSV,命名为JX14T2.将JX14T2 P5代次的病毒与高致病性PRRSV强、弱毒代表株进行生长特性比较分析,结果显示,JX14T2在Marc-145细胞上形成的细胞病变、病毒噬斑形态以及病毒增殖动态均与HP-PRRSV毒株相似.对JX14T2进行全长基因测序和序列比较分析,结果表明JX14T2基因组全长14960 bp,属于北美型毒株,其NSP2除存在的1＋29个氨基酸的缺失而外,在598-717 aa还存在120个氨基酸的缺失,与HP-PRRSV亲缘关系较近.本研究结果为掌握PRRSV流行情况以及致病机制提供了科学依据.
- 王鑫杨德强张文超姜一峰虞凌雪杨莘高飞李丽薇黄勤峰童光志周艳君
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪δ-冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
- 引言猪δ-冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是能够引起哺乳仔猪的腹泻、呕吐等临床表现的主要病原之一。PDCoV的核衣壳蛋白N蛋白是相对保守且免疫原性较好的蛋白,在PDCoV的诊断上...
- 李慧春张文超陈鹏飞谭祥梅赵雄伟李先斌虞凌雪姜一峰高飞童光志周艳君
- 猪Delta冠状病毒N蛋白的表达及单克隆抗体的制备
- 猪Delta冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是一种能够引起仔猪腹泻的新型冠状病毒,2014年该病毒在美国的猪群中爆发并造成普遍流行,给健康养猪带来了严重的威胁.由于PDCoV是近...
- 张文超虞凌雪李慧春陈鹏飞杨德强李先斌刘欢姜一峰杨莘高飞黄勤峰童光志周艳君
- 关键词：N蛋白单克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白在杆状病毒中的表达与鉴定
- <正>猪流行性腹泻是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起的新生仔猪严重腹泻的高度接触性传染病,近年来我国新流行的PEDV毒株对新生仔猪的发病率和死亡率均较高...
- 杨德强虞凌雪李慧春陈鹏飞李先斌张文超姜一峰杨莘高飞黄勤峰于海童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白杆状病毒蛋白表达
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体的制备被引量：7
- 2017年
- 本研究将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HuN4株的N基因克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了重组His-N蛋白,蛋白分子量为14 kDa,能被PRRSV阳性血清特异性识别。经超声裂解和SDS-PAGE检测后,重组蛋白主要以可溶性形式表达。随后利用磁珠纯化重组蛋白,采用背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后获得多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光检测结果表明,制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应活性,能够与真核表达或病毒的N蛋白发生特异性反应。
- 刘欢姜一峰张文超杨莘周艳君黄勤锋童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表达多克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与宿主细胞DDX5蛋白相互作用研究被引量：5
- 2017年
- 研究利用免疫共沉淀的方法证明猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白与MARC-145细胞DDX5蛋白之间存在相互作用,且两种蛋白共定位于MARC-145细胞质内。利用构建的EGFP-N和m Cherry-DDX5真核表达载体共转染MARC-145细胞后,发现N蛋白并不能将DDX5蛋白募集至细胞质。采用si RNA沉默MARC-145细胞DDX5基因表达之后,病毒复制水平上升;荧光定量检测结果显示,DDX5沉默表达也能够明显促进病毒基因组RNA和长链亚基因组RNA的转录水平。结果表明DDX5参与了病毒复制转录过程并对病毒增殖具有抑制作用。
- 刘欢黄勤锋张文超姜一峰杨莘高飞周艳君童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白相互作用
- 猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定被引量：8
- 2017年
- 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。
- 杨德强李慧春陈鹏飞王康李先斌张文超虞凌雪姜一峰高飞黄勤峰于海童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白杆状病毒SF9细胞
