王自强
- 作品数：15 被引量：49H指数：5
- 供职机构：上海市食品药品检验所更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 两种生化制药用原材料粗品中动物源成分的PCR检测被引量：2
- 2019年
- 目的:基于限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)技术及TaqMan探针实时荧光PCR技术,对三批垂体前叶粗品和2批糜蛋白酶原粗品的动物源性成分进行鉴定。方法:用DNA提取试剂盒提取样品DNA,以DNA提取液为模板分别进行PCR-RFLP及TaqMan探针实时荧光PCR,检测样品中所含动物源性成分是否与标称动物来源一致。结果:经两种PCR方法检测后确认,3批垂体前叶样品与2批糜蛋白酶原样品所含有的动物源性成分与标称来源一致。结论:生化制药用垂体前叶粗品和糜蛋白酶原粗品可采用PCR-RFLP方法和TaqMan探针实时荧光PCR方法鉴别种属来源。
- 李松播王自强邵泓陈钢
- 关键词：垂体前叶糜蛋白酶原
- 一种单克隆细胞株及其在测定IL‑6R抑制剂相对生物学活性中的应用
- 本发明公开了一种单克隆细胞株，其为携带有受SIE调控的荧光素酶基因且能稳定表达荧光素酶的人肾上皮细胞293T细胞，命名为293T‑SIE(保藏编号为CGMCC No.13816，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通...
- 王自强陈钢王灿董闪闪邵泓吴利红
- 文献传递
- 肝素钠中猪、牛及羊源性成分的PCR检测被引量：8
- 2015年
- 目的:采用常规PCR及实时荧光PCR方法检测肝素钠粗品及原料药中的猪、牛、羊源性成分。方法:利用土壤基因组DNA提取纯化试剂盒从肝素钠粗品及原料药中提取残留核酸,以其为模板,通过常规PCR及实时荧光PCR法进行动物源性成分鉴定。以提取猪肝、牛心、羊肝的DNA为对照品,验证所建立的常规PCR法及实时荧光PCR法的特异性及灵敏度,并用以上两种方法对3批肝素钠粗品及4批肝素钠原料药进行动物源性成分鉴定。结果:采用的两种PCR方法对猪、牛、羊源性成分的鉴定具有特异性,且灵敏度分别达到pg级及10-1pg级。通过土壤基因组DNA提取纯化试剂盒成功从肝素钠粗品及原料药中提取获得适用于PCR反应的模板DNA,显示7批肝素钠样品均为猪源性产品,且未检出牛、羊源性成分污染。结论:建立了一种快速有效地从肝素钠粗品及原料药中提取DNA的方法,并成功通过两种PCR方法对其猪、牛、羊源性成分进行鉴定,为监督药品规范生产,保证用药安全提供了技术支持。
- 王自强何素婷邵泓陈钢
- 关键词：肝素钠种属鉴定
- 唾液酸对人卵泡刺激素生物活性评价的影响被引量：2
- 2020年
- 为了研究唾液酸对人卵泡刺激素(hFSH)生物活性的影响,本试验采用基于人卵巢颗粒样肿瘤细胞(KGN)的体外生物活性测定法和雌幼大鼠卵巢增重的体内生物活性测定法,测定经唾液酸酶酶切处理前后的重组人卵泡刺激素(rhFSH)和高纯度尿提取人卵泡刺激素(uhFSH)的体外、体内生物活性。结果表明,经唾液酸酶酶切处理后的rhFSH和uhFSH体内生物活性均丧失,并且唾液酸含量与hFSH体外生物活性呈负相关。通过进一步研究唾液酸酶酶切前后hFSH刺激与转染卵泡刺激素受体的中国仓鼠卵巢细胞(FSHR-CHO)中环磷酸腺苷(cAMP)生成量的关系,观察到唾液酸含量越低,cAMP生成量越高,为研究hFSH中唾液酸含量对其生物活性的影响提供参考。
- 汪泓王灿王自强陈钢邵泓
- 关键词：唾液酸体外生物活性
- 利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性
- 目的：利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性.
方法：采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得...
- 王自强王灿董闪闪邵泓陈钢
- 关键词：药物化学生物活性
- 利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性
- 2018年
- 目的:利用sis诱导元素(sis-inducible element,SIE)转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6(IL-6)受体拮抗剂的生物活性。方法:采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL 4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因,构建SIE转录活性荧光素酶报告基因系统,并进一步建立基于此系统的IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。结果:IL-6可激活293T-SIE稳定转染细胞中的荧光素酶报告基因,且具有量效关系。对此系统检测IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性进行方法学验证,显示本检测方法准确性及重复性均较好。结论:建立了一种基于荧光素酶报告基因系统的IL-6受体拮抗剂药物生物学活性检测方法,与现有方法相比,具有耗时少、准确性高、重复性好的优势。
- 王自强王灿董闪闪邵泓陈钢
- 关键词：荧光素酶报告基因生物学活性
- 实时荧光定量PCR和常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的对比研究被引量：4
- 2015年
- 目的对比实时荧光定量PCR与常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的有效性。方法对牛、猪源性肝水解肽样品肝脏至上清液工艺段样品进行DNA提取,采用实时荧光定量PCR和常规PCR同时检测样品中的DNA。结果实时荧光定量PCR和常规PCR在猪源、牛源肝水解肽从肝脏到酶解液的各工艺步骤段样品中,均检测到动物源性DNA,在上清液至超滤液四中,均未检测出动物源性DNA。结论两种方法均可用在检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分。实时荧光定量PCR同时还具有快速、简便、不污染环境、重复性好的特点,可明显提高工作质量及效率。
- 余燕何素婷王自强邓锋
- 关键词：肝水解肽荧光定量PCR常规PCR
- 玻璃酸酶粗品中猪、牛、羊源性成分的PCR检测被引量：6
- 2018年
- 基于限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术及TaqMan探针实时荧光PCR技术,建立针对玻璃酸酶粗品的猪、牛及羊源性成分鉴定方法。用DNA提取试剂盒提取玻璃酸酶粗品中的DNA,以DNA提取液为模板进行PCR-RFLP及TaqMan探针实时荧光PCR,检测样品中是否含有猪、牛、羊源性成分。2种PCR方法均具有良好的特异性,且皆可检测到0.01 ng/μl的猪、羊源性DNA,和0.1 ng/μl的牛源性DNA,实时荧光PCR方法更可检测到0.001 ng/μl的猪源性DNA。PCR-RFLP方法和TaqMan探针实时荧光PCR方法可用于检测生化药品原材料的种属来源。
- 周建华李松播王自强
- 关键词：玻璃酸酶种属鉴定实时荧光PCR
- PCR鉴定骨肽类制剂中动物源性成分被引量：3
- 2020年
- 目的基于分子鉴定技术建立适用于骨肽类制剂的种属鉴定方法,并对部分国内骨肽类制剂生产企业所使用的骨骼原材料的种属来源进行鉴定。方法以骨肽生产过程中的热压提取中间体作为供试品,采用优化的CTAB法提取核酸,通过PCR扩增、琼脂糖凝胶甴泳进行动物源性成分鉴定。结果采用成功建立的适用于骨骼热压提取中间体的鉴定方法对9家企业的样品进行检测,均只检出猪源性成分,未检出牛或羊源性成分。结论 9家企业均使用猪骨作为骨肽类制剂的原材料,符合相关药品标准觃定。
- 李松播王自强邵泓陈钢
- 关键词：骨肽生化药物种属鉴定
- 鹿瓜多肽体外活性测定方法的探讨研究被引量：7
- 2018年
- 目的:建立鹿瓜多肽体外活性测定方法。方法:根据鹿瓜多肽药理作用机制,选用敏感骨细胞株作为试验对象,CCK-8比色法探讨鹿瓜多肽对骨细胞株的增殖促进作用。同时对试验条件,包括培养基、细胞接种密度、药物作用时间、胎牛血清(FBS)浓度等进行探讨,建立鹿瓜多肽体外活性测定方法。对该方法线性、重复性进行验证,同时用该方法对2个厂家分别生产的鹿瓜多肽注射液和注射用鹿瓜多肽样品进行活性测定。结果:鹿瓜多肽对大鼠骨肉瘤细胞株(UMR106细胞株)具有增殖促进作用。选用不含谷氨酰胺,含1%FBS的DMEM培养液进行试验,细胞接种密度为2×10~4个·m L^(-1),药物作用细胞72 h,药物质量浓度在0.5~4 mg·m L^(-1)范围内,鹿瓜多肽对UMR106细胞株具有增殖促进作用,刺激指数可达2.97。对该方法进行方法学验证:鹿瓜多肽质量浓度在0.5~4 mg·m L^(-1)范围内,以药物浓度为横坐标,吸收度值为纵坐标进行线性拟合,相关系数(R^2)分别为0.971和0.968,均大于0.95,线性良好;对2个厂家生产的鹿瓜多肽注射液和注射用鹿瓜多肽样品重复测定3次,刺激指数平均值分别为2.72和1.86,RSD分别为9.6%和3.9%。结论:该方法可用于鹿瓜多肽体外活性测定。
- 王灿董闪闪王自强邵泓陈钢
- 关键词：鹿瓜多肽活性测定
