张丹丹
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金吉林省世行贷款农产品质量安全项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2015年
- 对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。
- 孙小宁裴志花卞路张丹丹马红霞
- 关键词：家蝇克隆原核表达
- 家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)的表达纯化及活性分析
- 2016年
- 为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ)进行扩增,并成功构建了重组表达质粒p ET-32a-Md-CBPⅠ,于大肠杆菌BL21(DE3)中得以高效表达,纯化并获得了MdCBPⅠ融合蛋白。进一步对该蛋白的亲和活性进行了研究,发现Md-CBPⅠ融合蛋白对几丁质以及纤维素均有一定的结合作用,且其对几丁质的结合作用相对较好。试验为家蝇几丁质结合蛋白生物学活性和免疫学活性的研究奠定了基础。
- 袁野闫恕张丹丹孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇原核表达
- 昆虫抗真菌肽的作用机制与应用研究进展被引量：2
- 2017年
- 昆虫抗真菌肽作为昆虫防御外来病原菌的第一道防线,是构成昆虫先天免疫系统的重要组成部分,不需要免疫记忆并能直接有效地消灭外来入侵的病原体。随着昆虫抗真菌肽的深入研究,目前已发现昆虫抗真菌肽80多种,其主要是通过破坏真菌细胞壁、改变细胞膜通透性及细胞内ROS的产生发挥抑制和杀灭真菌的作用。抗真菌肽的这种作用机制使其广谱且不易产生耐药性和副作用。在农业、食品及医药等多个领域中,昆虫抗真菌肽作为生物农药、天然的防腐剂及新型的抗真菌物质,尤其是对某些耐药性病原菌的杀灭作用更是引起了人们的关注,有望成为一种新型高效的抗真菌药物。
- 张丹丹刘磊唐艳裴志花孔令聪刘树明马红霞
- 关键词：昆虫抗真菌肽先天免疫耐药性抗真菌药物
- 一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测被引量：1
- 2015年
- 利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性。MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础。
- 李文婷闫恕张丹丹贾博岩唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：分泌表达
