杨德强
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪Delta冠状病毒N蛋白的表达及单克隆抗体的制备
- 猪Delta冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是一种能够引起仔猪腹泻的新型冠状病毒,2014年该病毒在美国的猪群中爆发并造成普遍流行,给健康养猪带来了严重的威胁。由于PDCoV是近...
- 张文超虞凌雪李慧春陈鹏飞杨德强李先斌刘欢姜一峰杨莘高飞黄勤峰童光志周艳君
- 关键词：N蛋白单克隆抗体
- 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：5
- 2019年
- 猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。
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- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JX14T2毒株的分离与鉴定被引量：1
- 2016年
- 江西省某猪场育肥猪群出现高热、呼吸困难和死亡等症状,为确定疫病病原,本实验室从发病猪场随机采取20份病死猪血样和组织,用RT-PCR的方法进行病原检测.结果显示,19份临床样品呈现猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）阳性.随后对病死猪肺组织进行病毒分离,结果显示分离的第1代病毒感染后48 h即可出现典型的致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,对传至第5代的病毒进行RT-PCR检测和间接免疫荧光鉴定,结果证实我们分离获得的病毒为PRRSV,命名为JX14T2.将JX14T2 P5代次的病毒与高致病性PRRSV强、弱毒代表株进行生长特性比较分析,结果显示,JX14T2在Marc-145细胞上形成的细胞病变、病毒噬斑形态以及病毒增殖动态均与HP-PRRSV毒株相似.对JX14T2进行全长基因测序和序列比较分析,结果表明JX14T2基因组全长14960 bp,属于北美型毒株,其NSP2除存在的1＋29个氨基酸的缺失而外,在598-717 aa还存在120个氨基酸的缺失,与HP-PRRSV亲缘关系较近.本研究结果为掌握PRRSV流行情况以及致病机制提供了科学依据.
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- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪Delta冠状病毒N蛋白的表达及单克隆抗体的制备
- 猪Delta冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是一种能够引起仔猪腹泻的新型冠状病毒,2014年该病毒在美国的猪群中爆发并造成普遍流行,给健康养猪带来了严重的威胁.由于PDCoV是近...
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- 关键词：N蛋白单克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白在杆状病毒中的表达与鉴定
- <正>猪流行性腹泻是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起的新生仔猪严重腹泻的高度接触性传染病,近年来我国新流行的PEDV毒株对新生仔猪的发病率和死亡率均较高...
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- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白杆状病毒蛋白表达
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定被引量：8
- 2017年
- 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。
- 杨德强李慧春陈鹏飞王康李先斌张文超虞凌雪姜一峰高飞黄勤峰于海童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白杆状病毒SF9细胞
- 猪流行性腹泻病毒HeB10/2014株的分离与鉴定被引量：6
- 2016年
- 为确定2014年河北某猪场哺乳仔猪群腹泻的病原,本研究从该发病猪场采集了22份临床样品,采用PCR方法进行腹泻病原的检测。结果显示其中17份样品为猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性,而猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)均为阴性。选取其中5份PEDV阳性样品在Vero细胞中进行病毒的分离,结果显示,仅一份样品在接种细胞24 h后即可观察到细胞病变。对病变细胞进行RT-PCR及间接免疫荧光鉴定均为PEDV阳性。将分离的病毒株命名为He B10/2014。将其在Vero细胞中传至F5代次后病毒增殖明显增快,病毒滴度于感染细胞24 h达到峰值。对分离株的S基因进行克隆和测序分析,结果显示该病毒分离株符合国内近年来流行病毒株S蛋白的变异特征,即在S蛋白中存在4个连续氨基酸的插入(^(59)QGVN^(62))和3个氨基酸的缺失(^(14)0N和^(163)NI^(164))。本研究结果表明分离获得的HeB10/2014株为国内近年来新的PEDV流行株。
- 王康王鑫杨德强侯怡轩谢春虞凌雪姜一峰杨莘高飞李丽薇黄勤峰童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP12蛋白的表达与鉴定被引量：1
- 2018年
- 本研究扩增了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Hu N4株的NSP12基因,将其克隆于pCold-Ⅰ载体中,获得重组质粒pCold-Ⅰ-NSP12,并转化于E.coli/BL21感受态细胞,在16℃条件下用1 mmol/L的IPTG诱导20 h后,用SDS-PAGE电泳检测表达产物,结果显示在大约18 kDa处出现目标蛋白。用PRRSV特异性阳性猪血清对表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被PRRSV阳性猪血清识别。将重组NSP12蛋白纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。在MARC-145细胞中,对获得的NSP12多抗血清分别进行Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定,结果显示本研究制备的NSP12多抗血清均可与感染的MARC-145细胞的PRRSV Hu N4株以及在MARC-145细胞中特异表达的NSP12蛋白发生免疫反应。PRRSV NSP12蛋白的表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NSP12在病毒感染过程中的作用奠定了基础。
- 张文超张文超虞凌雪姜一峰高飞李丽薇李丽薇李慧春陈鹏飞杨德强刘欢童光志杜雅楠
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达多抗
