孙靖然
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院青岛生物能源与过程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 真菌生物碱Brevianamides的生物合成机制的研究
- Brevianamides是一类由丝状真菌青霉（Penicillium）或曲霉（Aspergillus）产生的异戊二烯基化吲哚类生物碱（prenylated indole alkaloids），该家族成员Breviana...
- 孙靖然
- 短密青霉NRRL 864异戊烯基转移酶PbPT的克隆表达及功能分析
- 2016年
- 在对丝状真菌短密青霉(penicillium brevicompactum NRRL 864)的全基因组进行分析时,发现该真菌可能表达一种异戊烯基转移酶PbPT。通过反转录RT-PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)获得真菌cDNA,并以cDNA为模版,将编码PbPT的开放阅读框克隆到pET-28b构建表达载体pET28b-PbPT,将pET28b-PbPT转化Escherichia coli BL21(DE3)获得表达菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导高效表达PbPT,利用Ni-NTA树脂亲和纯化重组PbPT活性蛋白,并对该蛋白进行了底物特异性分析、产物结构鉴定以及酶促动力学分析。分析结果表明,以二甲基丙烯基二磷酸(dimethylallyl pyrophosphate,DMAPP)为供体,PbPT特异性催化异戊烯基转移至Brevianamide F的α位C上,生成Deoxybrevianamide E。Brevianamide F是合成真菌生物碱类杀虫抗生素brevianamides的重要中间体,真菌吲哚类异戊烯基转移酶家族新成员PbPT的发现。该研究为进一步寻找和阐明真菌生物碱类杀虫抗生素brevianamides的生物合成基因簇和合成途径奠定了基础。
- 孙靖然刘长宁李荣贵张伟李盛英
- 关键词：异戊烯基转移酶丝状真菌功能分析
