孙晓甜
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 青枯菌M5菌株特异基因组消减文库的构建被引量：1
- 2008年
- 为筛选青枯菌M5菌株特有的序列,利用SSH技术对青枯菌生理小种5号菌株M5(tester)和生理小种1号菌株GMI1000(driver)基因组进行了比较。分别提取二者基因组DNA,RsaⅠ酶切,将酶切后M5菌株DNA分为两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR扩增,并检测连接效率与消减效率。将获得的消减PCR产物,即差异基因/差异DNA片段,与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5α感受态细胞,建立消减文库。随机挑取96个白色克隆,经菌液PCR法测定,80个为预期阳性,含有预期的插入片段。首次构建了青枯菌M5菌株特异基因的抑制消减文库,为进一步筛选、克隆青枯菌M5菌株特异核苷酸片段奠定了基础。
- 李双双孙晓甜翟静娟郜刚闫桂琴
- 关键词：青枯菌抑制消减杂交文库基因组
