汪莹
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 前半胱天冬酶-1及活性位点突变真核表达载体的构建、表达及生物活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性。方法从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序;脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响。结果构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低。结论构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低。
- 汪莹王文军魏从文郑子瑞张艳红张部昌钟辉
- 关键词：炎症反应IL-1Β
- 利用Mps1特异性siRNA抑制人宫颈癌HeLaS3细胞增殖的研究
- 2013年
- 目的验证所设计的Mps1小干扰RNA(siRNA)的特异性,为其应用于肿瘤治疗提供研究基础。方法针对Mps1基因的5'端设计合成一个siRNA(简称为siMps1),利用Western印迹检测siMps1的干扰效果,以及干扰后对肿瘤细胞的增殖和有丝分裂的影响。进一步构建稳定表达siMps1的细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA,检测过表达外源Mps1能否恢复其内源基因缺失的表型。结果转染siMps1能够降低细胞中的Mps1蛋白水平,导致有丝分裂指数降低,染色体中期排列异常;进而通过克隆形成实验发现,HeLaS3细胞转染siMps1后大量死亡,出现多核细胞;构建的稳定细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA能够恢复Mps1缺失后的表型。结论该设计得到的siMps1具有很高特异性,有望应用于肿瘤的治疗中。
- 王文军凌有国汪莹张艳红张部昌胥全彬钟辉
- 关键词：小干扰RNA特异性肿瘤抑制
